[发明专利]一种BMPR2基因突变大鼠的制备方法及应用在审
| 申请号： | 201811194252.7 | 申请日： | 2018-10-12 |
| 公开（公告）号： | CN109266679A | 公开（公告）日： | 2019-01-25 |
| 发明（设计）人： | 荆志成;王晓建;李素琪;程春燕;吕子超;刘少飞;张思瑾;谭元卿;周玉平;刘倩倩 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院阜外医院;保定市长征心肺血管病研究所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;A01K67/027;A61K49/00 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 齐云 |
| 地址： | 100000 *** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大鼠 基因突变 制备 基因 应用 生物医药技术 肺动脉高压 受精卵 子代 大鼠模型 核酸序列 人类疾病 体外转录 子二代 交配 表型 合笼 诱导 注射 表现 | ||
1.一种BMPR2基因突变大鼠的制备方法，其特征在于，突变大鼠BMPR2基因，突变位点为c.C1471T。
2.根据权利要求1所述的BMPR2基因突变大鼠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
合成碱基序列分别如SEQ ID No.1-2所示的识别序列，并通过退火复性成识别片段；
将所述识别片段与经过酶切处理的线性化载体连接，得到Cas9-BMPR2-RNA重组载体，将所述Cas9-BMPR2-RNA重组载体转录并注射受精卵，得到注射受精卵；
将SD雌鼠与结扎过的SD雄鼠交配，并选取见栓的所述SD雌鼠，并将所述注射受精卵移植到见栓的所述SD雌鼠的壶腹部，得到Founder大鼠；
将所述Founder大鼠与野生型SD大鼠进行交配得到F1代大鼠并筛选得到F1代Bmpr2+/R491W大鼠；
将所述F1代Bmpr2+/R491W大鼠分为雄性杂合突变鼠和雌性杂合突变鼠，将所述雄性杂合突变鼠和所述雌性杂合突变鼠分别与野生型大鼠按比例合笼交配，得到BMPR2基因突变敲入F2代鼠；
将所述BMPR2基因突变敲入模型鼠在低压低氧诱导2-3周得到接近人类疾病表型的、严重的肺动脉高压模型鼠。
3.根据权利要求2所述的BMPR2基因突变大鼠的制备方法，其特征在于，所述酶切处理选用BSAI。
4.根据权利要求2所述的BMPR2基因突变大鼠的制备方法，其特征在于，所述SD雌鼠为7-8周龄，所述SD雌鼠由SD雌性大鼠注射激素进行超排得到。
5.根据权利要求4所述的BMPR2基因突变大鼠的制备方法，其特征在于，所述SD雌性大鼠为3-4周龄。
6.根据权利要求2所述的BMPR2基因突变大鼠的制备方法，其特征在于，所述雄性杂合突变鼠和所述雌性杂合突变鼠按照1-3:1的比例合笼。
7.根据权利要求2所述的BMPR2基因突变大鼠的制备方法，其特征在于，所述低压低氧条件为40-65KPa，9％-12％的O2。
8.根据权利要求2所述的BMPR2基因突变大鼠的制备方法，其特征在于，还包括对所述肺动脉高压模型鼠进行PCR鉴定，所述PCR鉴定的引物的碱基序列如SEQ ID NO.3-4所示。
9.如权利要求1所述的BMPR2基因突变大鼠的制备方法制备得到的BMPR2基因突变大鼠在筛选治疗遗传性肺动脉高压药物中的应用。
10.如权利要求1所述的BMPR2基因突变大鼠的制备方法制备得到的BMPR2基因突变大鼠在筛选治疗诱发性肺动脉高压药物中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国医学科学院阜外医院;保定市长征心肺血管病研究所，未经中国医学科学院阜外医院;保定市长征心肺血管病研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201811194252.7/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
