[发明专利]一种利用低温纤维素降解菌群提高低温下堆肥效率的方法

权利要求书

1.一种利用低温纤维素降解菌群提高低温下堆肥效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、筛选低温纤维素降解菌；

步骤二、将筛选得到的低温纤维素降解菌与堆肥用纤维素降解菌混合制备成混合菌液；

步骤三、在堆肥槽内加入牛粪便、锯末以及步骤二中制得的混合菌液，并调整含水量。

2.根据权利要求1所述的一种利用低温纤维素降解菌群提高低温下堆肥效率的方法，其特征在于：所述低温纤维素降解菌的筛选方法按照下列步骤进行：一、纤维素降解菌的分离与纯化，二、低温纤维素降解菌的初筛与复筛，三、低温纤维素降解菌酶活力测定。

3.根据权利要求2所述的一种利用低温纤维素降解菌群提高低温下堆肥效率的方法，其特征在于：所述纤维素降解菌的分离与纯化的过程如下，称取10g牛粪便样品放入装有玻璃珠的250mL锥形瓶中，加入100mL灭菌蒸馏水，在摇床中振荡30min；取10mL悬液加入到灭菌后的富集培养基中，20℃恒温振荡培养3～4d，至培养基变浑浊。将浑浊的培养基进行10倍梯度稀释，取合适倍数的稀释液于羧甲基纤维素平板上均匀涂布，20℃培养3～4d，至形成单个菌落；将单个菌落反复划线培养，以此得到纯菌株。

4.根据权利要求2所述的一种利用低温纤维素降解菌群提高低温下堆肥效率的方法，其特征在于：所述低温纤维素降解菌的初筛与复筛的过程如下，将纯纤维素降解菌株用接种环划线接种子羧甲基纤维素培养基上，20℃培养至形成单个菌落；用0.2％刚果红染色15min，用蒸馏水洗去染液后，再以1mol/L NaCl浸洗15min，根据产生水解圈与否判断是否为纤维素降解菌，其次据水解圈直径的大小，筛选出水解圈与菌落直径比值较大的菌株；得到的菌种分别在0℃、4℃、10℃、15℃下培养3～4d。

5.根据权利要求2所述的一种利用低温纤维素降解菌群提高低温下堆肥效率的方法，其特征在于：所述低温纤维素降解菌酶活力测定的过程如下，取0.05moL/L含有2％CMC-Na的柠檬酸缓冲液1.5mL于离心管中，加入0.5mL制备好的粗酶液，50℃放置30min，后加入试剂DNS，100℃水浴5min，立即冰浴，加8mL水稀释，并于540nm处测溶液的光密度值。

6.根据权利要求2所述的一种利用低温纤维素降解菌群提高低温下堆肥效率的方法，其特征在于：所述低温纤维素降解菌酶活力测定的过程如下：取4个离心管都加入0.05moL/L的柠檬酸缓冲液1.5mL，再加入0.5mL制备好的粗酶液，其中一管作为对照管并加入1.5mL试剂DNS将酶活性失活；四个离心管50℃水浴预热5min，各加入0.05g定量滤纸条，50℃放置反应30min；反应后向另外3个离心管中各加入1.5mLDNS试剂以终止酶反应；将四支离心管充分混匀后100℃水浴加热5min，取出冰浴冷却后用蒸馏水定容至10mL，以对照管为空白对照，测定540nm处测溶液的光密度值。

7.根据权利要求1所述的一种利用低温纤维素降解菌群提高低温下堆肥效率的方法，其特征在于：在步骤二中，所述低温纤维素降解菌为产碱杆菌属的粪产碱杆菌以及芽孢杆菌属的龙舌兰芽孢杆菌。

8.根据权利要求1所述的一种利用低温纤维素降解菌群提高低温下堆肥效率的方法，其特征在于：在步骤三中，所述牛粪便与锯末的重量比3∶1。

9.根据权利要求1所述的一种利用低温纤维素降解菌群提高低温下堆肥效率的方法，其特征在于：在步骤三中，所述堆肥反应物中含水量为55-60％。