[发明专利]一种利用地衣芽孢杆菌发酵时流加蔗糖生产γ-聚谷氨酸的方法

权利要求书

1.一种利用地衣芽孢杆菌发酵时流加蔗糖生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，包括以下步骤：

菌种活化：将地衣芽孢杆菌的原始菌株接种在斜面培养基上，于30℃-37℃培养16-18小时，制备活化后的斜面种子；

所述地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）TKPG091，该菌株已于2009年10月14日在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为 CGMCC No.3336；

（2）种子液的制备；将步骤（1）中活化后的斜面种子接种于种子培养基中，37℃，摇床转速220rpm培养16小时至对数生长期，得到产γ-聚谷氨酸的种子液；

（3）发酵罐发酵：按照以发酵培养基体积计，5％接种量，将步骤（2）中的种子液接种于发酵培养基中，控制初始发酵温度37-38℃，罐压0.02-0.05MPa；通风量0.5-1.5vvm；初始发酵液pH值调至7.0，培养72小时；在发酵时间为24h-66h期间的42h内，均匀流加蔗糖溶液，流加量按培养基体积计算，为每升4g-6g；

（4）提取：发酵结束后离心去菌体，然后用4-5倍上清液体积的乙醇，醇沉析出聚谷氨酸，然后再复溶于上清液体积的蒸馏水后，干燥；制备出干粉状γ-聚谷氨酸。

2.根据权利要求1所述的一种利用地衣芽孢杆菌发酵时流加蔗糖生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，通过高效液相检测样品中γ-聚谷氨酸的产量。

3.根据权利要求1所述的一种利用地衣芽孢杆菌发酵时流加蔗糖生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，所述斜面培养基组成为:胰蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl10g/L，琼脂粉20g/L。

4.根据权利要求1所述的一种利用地衣芽孢杆菌发酵时流加蔗糖生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，所述种子培养基组成为：葡萄糖45 g/L，玉米浆 10g/L，胰蛋白胨15 g/L，氯化钾 0.5 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L，pH 7.2，余量为水；在温度125℃下灭菌30-40min，得到所述的种子培养基。

5.根据权利要求1所述的一种利用地衣芽孢杆菌发酵时流加蔗糖生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，所述发酵培养基组成为：葡萄糖：80g/L，玉米浆：25g/L，氯化钠：15g/L，MgSO₄·7H₂O：2g/L，无水氯化钙：1.5g/L，NH₄Cl：5.52g/L，余量为水；在温度125℃下灭菌40min。

6.根据权利要求1所述的一种利用地衣芽孢杆菌发酵时流加蔗糖生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，所述干燥指的是利用喷雾干燥方法，制备出干粉状γ-聚谷氨酸。

7.根据权利要求1所述的一种利用地衣芽孢杆菌发酵时流加蔗糖生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，所述γ-聚谷氨酸的分子量为20万到200万道尔顿。

8.根据权利要求1所述的一种利用地衣芽孢杆菌发酵时流加蔗糖生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，蔗糖的流加速度为每小时每L流加0.095g-0.143g。