[发明专利]一种双靶标肿瘤疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种双靶标肿瘤疫苗，其特征在于，由肿瘤血管内皮标志物GPR124重组真核表达质粒和融合肽通过静电作用结合，所述肿瘤血管内皮标志物GPR124重组真核表达质粒由GPR124基因和真核表达载体连接组成，所述GPR124基因由SEQ ID No.2所述的核苷酸序列构成；所述融合肽由穿膜肽与AVPI肽连接组成，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.根据权利要求1所述的双靶标肿瘤疫苗，其特征在于，所述真核表达载体为pcDNA3.5。

3.根据权利要求1所述的双靶标肿瘤疫苗，其特征在于，所述AVPI肽的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

4.权利要求1所述的双靶标肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）构建所述肿瘤血管内皮标志物GPR124重组真核表达质粒；

2）制备所述穿膜肽与AVPI肽的融合肽；

3）制备所述双靶标肿瘤疫苗：于室温、混旋条件下，向含有所述肿瘤血管内皮标志物GPR124重组真核表达质粒的等渗电解质溶液中，滴加所述穿膜肽与AVPI肽的融合肽溶液，滴加完毕后，室温下继续混旋60-120分钟，再静置60-120分钟，即得所述双靶标肿瘤疫苗。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1）先克隆得到GPR124基因，再将其插入真核表达载体pcDNA3.5的XBI和Ecor1多克隆位点之间，构建肿瘤血管内皮标志物GPR124基因重组真核表达质粒pcDNA3.5/ GPR124。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2）所述融合肽用固相合成法制备。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤3）中所述重组真核表达质粒的浓度为0.5-1.5mg/ml，所述融合肽的浓度为0.5-1.5mg/ml,重组真核表达质粒和融合肽为等体积比滴加。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤3）中所述重组真核表达质粒的浓度为1.0 mg/ml，所述融合肽的浓度为1.0 mg/ml,重组真核表达质粒和融合肽为等体积比滴加。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤3）中所述等渗电解质溶液为PBS、生理盐水、0.9% NaCl溶液和5%葡萄糖溶液中的任意一种或多种，所述室温下继续混旋的时间为90分钟 ，静置时间为90分钟。

10.权利要求1-3中任意一项所述的双靶标肿瘤疫苗在用于制备抗肿瘤药物中的应用。