[发明专利]一种用于检测胃癌抗原MG7-Ag的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测胃癌抗原MG7-Ag的单克隆抗体组合物，所述组合物包括：

由保藏号为CCTCC NO:C2016129的杂交瘤细胞株MG7分泌的MG7-Ab；

由保藏号为CCTCC NO:C2016130的杂交瘤细胞株MGd1分泌的MGd1-Ab；

和由保藏号为CCTCC NO:C2016125的杂交瘤细胞株CEA-37分泌的CEA37-Ab。

2.如权利要求1所述的组合物在制备用于检测胃癌抗原MG7-Ag的试剂盒中的用途；

优选地，所述试剂盒为ELISA试剂盒或化学发光试剂盒。

3.一种用于检测胃癌抗原MG7-Ag的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括包被MG7-Ab和MGd1-Ab的酶联免疫微孔板、辣根过氧化酶标记的CEA37-Ab、显色剂、MG7-Ag标准品；

优选地，所述显色剂为显色剂是H₂O₂和TMB。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其中，所述微孔板是通过包括下述步骤的方法制备的：

a)以包被缓冲液对MG7-Ab和MGd1-Ab进行稀释，得到MG7-Ab和MGd1-Ab的浓度为0.5μg/mL-2.0μg/mL的稀释液，在微孔板的每孔中加入所述稀释液共100μL，4℃条件下过夜后洗涤，然后拍干或甩干；

b)向经步骤a)处理的微孔板中加入封闭液，每孔加入封闭液200μL，25℃条件下封闭3小时后洗涤，然后拍干或甩干；

c)将经步骤b)处理的微孔板进行室温干燥处理，真空密封，即得；

优选地，所述MG7-Ab和MGd1-Ab的质量比为0.5-2.5:1，优选2.0:1；

优选地，在所述步骤a)中，所述包被缓冲液为50mM的碳酸盐缓冲液，pH值为9.6；

更优选地，在步骤a)中，所述MG7-Ab和MGd1-Ab的最终包被浓度为0.5μg/mL-2.0μg/mL；

优选地，所述封闭液为0.1％～1.0％(g/mL)的酪蛋白钠溶液；优选地，所述封闭液是通过下述方法制备的：称取1.0-10g酪蛋白钠，将所述酪蛋白钠溶解在1L Tris-HCl缓冲液中，所述Tris-HCl缓冲液浓度为0.01M、pH为7.2；更优选地，所述Tris-HCl缓冲液是通过下述方法制备的：称取1.21g Tris，以双蒸水加至800mL，然后以浓盐酸调节pH至7.2，最后定容至1000mL，高压灭菌后，贮存于2～8℃冰箱保存。

5.如权利要求3或4所述的试剂盒的使用方法，所述方法包括以下步骤：

1)向包被有MG7-Ab和MGd1-Ab的微孔板的微孔中加入样本，同时以加入所述MG7-Ag标准品的微孔作为对照孔，于37℃下孵育2.0小时，洗涤后拍干或甩干；

2)向经步骤1)处理的微孔板中加入辣根过氧化酶标记的CEA37-Ab，于37℃下孵育0.5小时，洗涤后拍干或甩干；

3)向经步骤2)处理的微孔板中加入H₂O₂和TMB，避光显色15分钟，加入终止液终止反应，测定吸光度值；

4)根据标准品的吸光度得到标准曲线，再根据所述标准曲线和样本溶液的吸光度计算所述样本中的MG7-Ag的含量；

优选地，所述样本为人的血浆。

6.一种用于检测胃癌抗原MG7-Ag的化学发光法试剂盒，所述试剂盒包括包被MG7-Ab和MGd1-Ab的化学发光微孔板，辣根过氧化酶标记的CEA37-Ab、化学发光显色剂鲁米诺、MG7-Ag标准品。