[发明专利]一种检测β-内酰胺类抗生素的电化学方法

权利要求书

1.一种检测β-内酰胺类抗生素的电化学方法，其特征在于：工作电极采用电聚合亚甲基蓝、新德里金属-β-内酰胺酶-1（NDM-1酶）和粘合剂戊二醛共同修饰玻碳电极表面，工作电极的制备及抗生素的检测方法如下所述：

步骤一、玻碳电极的打磨：首先在麂皮上分别撒上少量1µm，0.3 µm和0.05 µm的抛光粉Al₂O₃，将玻碳电极先在1µm抛光粉上打磨，用去离子水清洗玻碳电极表面；接着将玻碳电极在0.3 µm抛光粉上打磨，用去离子水清洗玻碳电极表面；最后将玻碳电极在0.05 µm抛光粉上打磨，用去离子水清洗电极表面；然后将电极移入超声水浴中，依次用蒸馏水，乙醇和蒸馏水清洗2 min，室温下晾干；

步骤二、玻碳电极的活化：将步骤一中打磨好的玻碳电极放入pH=6的磷酸盐缓冲液中，构建三电极结构，其中的三电极结构是以铂丝电极作为对电极，银氯化银电极作为参比电极，玻碳电极作为工作电极，利用辰华电化学工作站将电极活化20圈，方法为循环伏安法，条件为：起始电位-0.6 V，最高电位2 V；

步骤三、亚甲基蓝的电聚合：将步骤二中活化的玻碳电极置于含有10 mM亚甲基蓝pH=6的缓冲液中，利用辰华电化学工作站扫描20圈，将亚甲基蓝聚合到活化后的玻碳电极的表面；方法为循环伏安法，条件为：起始电位-0.8 V，最高电位0.6 V；用去离子水清洗玻碳电极，并将电极置于装有蒸馏水的烧杯中10 min以除去表面未被聚合的亚甲基蓝单体，用蒸馏水冲洗电极表面，在室温下晾干；

步骤四、固载NDM-1酶的工作电极的制备：取4 µL NDM-1酶和2 µL质量分数为1.0 % 的戊二醛混合均匀，将6 µL混合物滴涂于步骤三中制备的聚亚甲基蓝修饰的玻碳电极表面，将电极置于4 ℃冰箱中晾干12 h；用缓冲液冲洗电极表面以除去表面未被固定的酶；

步骤五、抗生素的检测：将步骤四中制备的固载NDM-1酶的玻碳电极浸入含有抗生素青霉素钠、氨苄青霉素的溶液中检测，检测方法为差分脉冲伏安法，条件为：起始电位-0.6 V，最高电位0.2 V。