[发明专利]一种油菜组织培养快速繁殖及壮苗的方法

说明书

本发明公开了一种油菜组织培养快速繁殖及壮苗的方法，具体包括将甘蓝型油菜Polima CMS恢复系627R、621R、616R油菜种子发芽后进行无菌苗的下胚轴或油菜子叶的预培养后在进行分化培养，每次培养都适用特定的培养基，得到不定芽后再置于添加有矮壮素的培养基中进行培养，得到壮苗。本发明所述方法实用性强，大幅提高油菜组织的繁殖速度，有利于不定芽的根须生长，得到强壮幼苗，建立和优化了恢复系油菜的快繁再生体系，可快速获得具有优良性状的油菜新种质。

技术领域

本发明涉及农作物培养领域，特别涉及一种油菜组织培养快速繁殖及壮苗的方法及应用。

背景技术

油菜属于十字花科芸薹属，是世界四大油料作物之一，也是我国重要的油料作物之一。油菜种子可以榨取食用油，饼粕可用作饲料，茎杆可以食用，同时油菜花具有观赏价值，大面积种植促进了城郊赏花经济发展。油菜是可再生资源，被认为是生物柴油最理想的原料。随着农业生物技术的发展，油菜组织培养快速繁殖的体系建立和改良对加速油菜育种新资源的创建具有重要意义。植物组织培养是指利用植物离体的器官、组织或者细胞，在适宜的人工培养和无菌条件下进行培养，使其增殖、生长、发育形成植株的方法。植物器官发生途径是指在组织培养中，再生植株不是通过胚胎，而是通过分生中心直接分化器官，最终形成完整植株的总过程。通常分为器官间接发生途径和器官直接发生途径。器官间接发生途径是指外植体先诱导产生愈伤组织，然后愈伤组织再诱导产生芽和根系，主要优点是繁殖系数高，在短时间能够形成大量的器官分化，产生大量小植株。但是随着愈伤组织继代时间的延长，表现出的植株再生能力会逐渐降低，甚至消失。器官直接发生途径是指外植体在培养基上直接诱导产生芽和根，优点是细胞染色体倍数稳定，发生变异的频率低，保证所培养的试管苗保持来源母株良好的种性。叶腋间的发芽、不定芽如茎尖、花托等都可以诱导产生不定芽。总体来看，油菜的再生频率相对较低，这可能与外植体类型、基因型有关，因此建立高效、重复性强的诱导再生体系是创建油菜新资源的应用重点之一[1-6]。经过多年研究，国内外许多研究单位已经建立了适用性的油菜离体再生体系，然而研究表明油菜不同基因型、不同外植体之间最佳离体再生的培养条件存在差异，阻碍了油菜组织培养快速繁殖研究的发展[8-10]。在油菜快速繁殖的体系中，应用较多的外植体有大田植株的花、侧芽、无菌苗的子叶、下胚轴以及根段等，这些外植体在再生体系中能够短期内获得大量的植株，不受到季节和地点等因素的限制[11-12]。甘蓝型油菜(Brassica napus L.)627R，621R，616R是高产优质杂交油菜新品种的核心恢复系。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种油菜组织培养快速繁殖及壮苗的方法，所述方法建立了一个高效的恢复系油菜的快繁再生体系，可快速获得具有优良性状的油菜新种质。

本发明的技术方案为：

一种油菜组织培养快速繁殖及壮苗的方法，具体包括以下步骤：

1)发芽：挑选饱满、大小均匀和无病虫害的油菜种子，用75％酒精消毒1-2min，0.1％升汞消毒7-10min，再用无菌水冲洗3-5次，在无菌滤纸上晾干后，播种到1/2MS培养基上，在20-30℃，12h光照和12h黑暗交替的条件下发芽；

2)油菜组织的预培养，切取步骤1)中培养6天的无菌苗的下胚轴或油菜子叶，置于预培养基M1中培养2-5天；

所述预培养基M1为：在MS培养基中，添加有0.5-2.0mg/L 2,4-D、0.5-1.0mg/L 6-BA、25-35g/L蔗糖、6-10g/L琼脂；所述预培养基M1的PH值为5.8-5.9；

3)油菜组织的分化培养，将步骤2)中经过预培养的下胚轴或油菜子叶转移到分化培养基M2-N或M2-I中培养25-35天，得到不定芽；