[发明专利]基于E184L基因的非洲猪瘟病毒检测试剂盒和检测方法

说明书

本发明公开一种基于E184L基因的非洲猪瘟病毒检测试剂盒和检测方法，涉及病毒检测技术领域。本发明提供一组新的用于检测非洲猪瘟病毒的QPCR组合物，包括以下引物和与引物配合使用的探针：E184L上游引物为SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；E184L下游引物为SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；探针为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。利用该组合物可以高效快速地检测样品中是否含有非洲猪瘟病毒，且检测的灵敏度高，特异性强。本发明还提供一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒及利用本发明的QPCR组合物检测非洲猪瘟病毒的方法。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域。更具体地，涉及一种基于E184L基因的非洲猪瘟病毒的检测试剂盒和检测方法。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus，ASFV)引起猪的一种急性、高度接触性传染病。非洲猪瘟病毒属非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)，是一种有囊膜的单分子线状双链DNA病毒,也是虫媒病毒中唯一的DNA病毒，基因组长约170-190kb，编码150-200种蛋白质，不同病毒株的基因组长度差异位于基因组左端38-47kb、右端13-22kb的可变区域，中央为保守区。野猪和软蜱是非洲猪瘟病毒的野生储存宿主和传播媒介。非洲猪瘟具有和经典猪瘟相似的临床症状和病理变化，表现为发热、皮肤发绀和淋巴结、肾、胃肠黏膜明显出血，强毒株感染的潜伏期短，死亡率高达100％。非洲猪瘟目前无有效的疫苗用于防疫，被世界动物卫生组织(OIE)列为必须通报疾病，我国将其列为一类动物疫病。

目前，已建立的非洲猪瘟病毒检测方法包括病毒分离鉴定、病毒抗原检测和病毒核酸检测(OIE)。其中，非洲猪瘟病毒的分离鉴定试验周期长，不适合快速检测。采用荧光抗体试验和抗原捕获试验检测非洲猪瘟病毒抗原，具备快速、准确的特点，但敏感性偏低，易出现假阴性结果；常规PCR方法的特异性高，成本低，但是敏感性低；荧光定量PCR技术具有高效快捷、敏感性高、特异性强等优点，已在非洲猪瘟病毒核酸检测方面得到应用。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一组用于检测非洲猪瘟病毒的QPCR组合物，利用该组合物可以高效快速地检测样品中是否含有非洲猪瘟病毒，且检测的灵敏度高，特异性强。

本发明的第二个目的在于提供一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒。

本发明的第三个目的在于提供一种利用本发明的QPCR组合物检测非洲猪瘟病毒的方法。

为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：

一组用于检测非洲猪瘟病毒的QPCR组合物，包括以下引物和与引物配合使用的探针：

E184L上游引物为SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；

E184L下游引物为SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；

探针为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

优选地，所述探针在5’端标记FAM，3’端标记BHQ。

本发明还提供一种如上所述的QPCR组合物在制备非洲猪瘟病毒检测试剂盒中的应用。

根据本发明的第二个目的，本发明还提供一种基于E184L基因的非洲猪瘟病毒检测试剂盒，所述试剂盒包括如上所述的QPCR组合物。

优选地，所述试剂盒还包括阳性对照。

优选地，所述阳性对照为包括E184L基因序列的重组质粒。

根据本发明的第三个目的，本发明还提供一种基于E184L基因的非洲猪瘟病毒检测方法，所述检测方法包括：

提取样品的基因组DNA；