[发明专利]一种预防叶子花组培苗黄化的方法

权利要求书

1.一种预防叶子花组培苗黄化的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）外植体选择：于晴朗的天气上午9:30~10:00，在健壮、无病虫害的母株上采集当年生嫩梢；

（2）消毒处理：用抹布轻轻擦掉嫩梢的表皮茸毛，然后用自来水冲洗干净后，将采集的嫩梢剪成6-7cm长的段，高锰酸钾浸泡5min，多菌灵浸泡8min后放在烧杯里，用干净纱布盖住烧杯口，放在自来水下冲洗2-3h，然后将浸泡冲洗过的嫩梢带入超净工作台，首先用75%酒精消毒30s后，用无菌水冲洗4-5次；再用0.1%升汞+0.05%吐温消毒8min，最后用无菌水冲洗5-6次；

（3）接种：将消毒好的外植体放在铺有无菌滤纸的培养皿上，用解剖刀将每段外植体切成2-3cm长的小段，每段带一个芽眼，然后将带芽眼的外植体接入初代培养基，每瓶接一个外植体；

（4）初代培养：初代培养培养温度为25±1℃，光照强度为1500-3000Lx，光照波长为350～750nm，光照时数为16～18h/d；其中，所述初代培养基各组分与含量分别为：改良MS+BA2.0mg/L+蔗糖30g/L，所述改良MS培养基包含NH₄NO₃1.65g/L、 KH₂PO₄0.17g/L、KNO₃1.9g/L、CaCl₂·2H₂O0.088g/L、FeSO₄·7H₂O0.0417g/L、Na₂EDTA0.0373g/L和MS其余成分；

（5）增殖培养：将茎段初代培养得到的芽接种于增殖培养基，置于温度25±1℃，光照强度1500-3000LX，光照10~14h/d的环境中进行增殖培养。

2.根据权利要求1所述的预防叶子花组培苗黄化的方法，其特征在于，步骤（2）中，酒精及升汞+吐温消毒过程中，需不停摇晃瓶子，使每段外植体都能与液体充分接触。

3.根据权利要求1所述的预防叶子花组培苗黄化的方法，其特征在于，步骤（3）中，培养皿需经高温灭菌，解剖刀需经干热灭菌器和酒精灯消毒。

4.根据权利要求1所述的预防叶子花组培苗黄化的方法，其特征在于，步骤（5）中，增殖培养基为MS+BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L。