[发明专利]猫泛白细胞减少症病毒LAMP检测引物组、试剂盒以及检测方法有效
| 申请号： | 201811203431.2 | 申请日： | 2018-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN109136410B | 公开（公告）日： | 2021-09-28 |
| 发明（设计）人： | 陆涛峰;陈洪岩;周洁;胡建华;高诚 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 王玉松 |
| 地址： | 150069 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 泛白 细胞 减少 病毒 lamp 检测 引物 试剂盒 以及 方法 | ||
1.一种猫泛白细胞减少症病毒LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由LAMP反应液组成，所述LAMP反应液由如下成分组成：
Tris-HCl 20mM、(NH4)2SO4 10mM、KCl 10mM、Triton X-100 0.1%、MgSO4 6mM、dNTP Mix10mM、FIP引物 1.6μM、BIP引物 1.6μM、F3引物0.2μM、B3引物0.2μM、Bst DNA聚合酶 9~12U、甜菜碱 1mM以及可视化染料指示剂；
所述FIP引物、所述BIP引物、所述F3引物以及所述B3引物的序列如下：
F3: 5’-TGCATCATTGATGGTTGC-3’；
B3: 5’-AGTAAGTGTACTGGCACAG-3’；
FIP: 5’-GGTTGGTTTCCATGGATAAAAACCTATGCCATTTACTCCAGCAG-3’；
BIP: 5’-CATCTCATACTGGAACTAGTGGCATGAACATCATCTGGATCTGTAC-3’。
2.如权利要求1所述的猫泛白细胞减少症病毒LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述可视化染料指示剂包括钙黄绿素20μM以及氯化锰300μM。
3.一种应用权利要求1~2中任一项所述试剂盒的猫泛白细胞减少症病毒LAMP检测方法，其特征在于，所述方法应用于非诊断目的，包括如下步骤：
S1：对待检样品的DNA进行提取，作为模板添加到LAMP反应液中，进行LAMP扩增；
S2：通过琼脂糖凝胶电泳以及肉眼判断，对得到的LAMP扩增产物进行分析。
4.如权利要求3所述的猫泛白细胞减少症病毒LAMP检测方法，其特征在于，LAMP扩增的反应体系中，模板DNA的拷贝数不少于100个拷贝。
5.如权利要求3所述的猫泛白细胞减少症病毒LAMP检测方法，其特征在于， LAMP扩增的反应条件如下：
将所述反应体系置于60~65℃的恒温水浴中反应30~60min。
6.如权利要求5所述的猫泛白细胞减少症病毒LAMP检测方法，其特征在于，LAMP扩增反应中，恒温水浴结束后，将所述反应体系取出、置于80℃水浴中10min，终止反应。
7.如权利要求3所述的猫泛白细胞减少症病毒LAMP检测方法，其特征在于，肉眼判断的方法如下：样品呈黄绿色则为阳性，呈橘黄色则为阴性。
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