[发明专利]一种维吉尼亚霉素高产菌株的高通量筛选方法有效
| 申请号： | 201811203493.3 | 申请日： | 2018-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN109536399B | 公开（公告）日： | 2021-05-14 |
| 发明（设计）人： | 王福聚;李小连;董华强;孙强 | 申请（专利权）人： | 北京泛球生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;G01N21/78;G01N21/31;C12R1/465 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;陈征 |
| 地址： | 100096 北京市海*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 维吉尼亚 霉素 高产 菌株 通量 筛选 方法 | ||
1.一种维吉尼亚霉素高产菌株的高通量筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将维吉尼亚霉素生产菌株进行发酵培养；
(2)提取发酵液中的维吉尼亚霉素，得到检测样品；
(3)在所述检测样品中加入显色剂进行显色反应；
(4)测定595nm处的吸光值，根据吸光值计算生产菌株的维吉尼亚产量；
所述显色剂由如下组分组成：对二甲氨基苯甲醛，7.5g/L；异丙醇，体积百分含量为30％；盐酸，体积百分含量为2％。
2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述显色反应中检测样品和显色剂的体积比为1：1～1：5。
3.根据权利要求1或2所述的筛选方法，其特征在于，所述显色反应为在60～80℃反应5min～30min。
4.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，所述显色反应为在70～80℃反应10min～20min。
5.根据权利要求1、2或4所述的筛选方法，其特征在于，所述提取发酵液中的维吉尼亚霉素为在发酵液中加入提取液进行提取；
所述提取液为乙腈、丙酮、甲醇中的一种或多种。
6.根据权利要求5所述的筛选方法，其特征在于，所述发酵液和提取液的体积比为1：1～1：5。
7.根据权利要求1、2或4所述的筛选方法，其特征在于，所述检测样品的制备为在发酵液中加入乙腈进行振荡提取20min～100min，分离上清液和沉淀，得到的上清液即为检测样品。
8.根据权利要求7所述的筛选方法，其特征在于，所述振荡提取的时间为30min～60min。
9.根据权利要求1、2、4、6或8所述的筛选方法，其特征在于，所述发酵培养的培养基由如下组分组成：可溶性淀粉5～30g/L，豆粕2～5g/L，酵母浸膏1～5g/L，葡萄糖5～50g/L，亚麻油1～5g/L，磷酸氢二钾0.2～1g/L，硫酸亚铁0.01-0.05g/L，硫酸铵0.2～2g/L，碳酸钙1～5g/L。
10.根据权利要求9所述的筛选方法，其特征在于，所述发酵培养为在多孔板中培养。
11.根据权利要求9所述的筛选方法，其特征在于，所述发酵的温度为30～32℃，转速为200～1000rpm。
12.根据权利要求1、2、4、6、8、10或11所述的筛选方法，其特征在于，所述维吉尼亚霉素生产菌株为链霉菌属微生物。
13.根据权利要求12所述的筛选方法，其特征在于，所述链霉菌属微生物为维吉尼亚链霉菌(
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