[发明专利]研究离体百合植株同化物运输方向和路径的荧光示踪方法

权利要求书

1.一种研究离体百合植株同化物运输方向和路径的荧光示踪方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)准备植株和染料

(1.1)以生长于培养基中的离体百合鳞茎作为待处理植株；

(1.2)配制质量浓度为1～2mg/mL的CFDA荧光染料溶液；取120μl CFDA溶液，将医用药棉浸润至饱和；

(2)将染料引入植株

(2.1)选择离体百合鳞茎的外层鳞片或叶片作为引入部位，用双面刀在鳞片中部横切0.3mm宽的楔形切口，深度以贯穿维管束为准；或者，选择百合离体植株的叶片作为引入部位，用耐水细砂纸将叶背末端轻轻摩擦至磨破维管束；

(2.2)将浸润了CFDA溶液的医用药棉塞进鳞片切口，或平铺在叶片维管束横断面处；用石蜡封口膜包裹鳞片或叶片后，先以丙酮浸润的医用药棉封塞再用石蜡封口膜包裹；最后用锡箔纸覆盖鳞片或叶片的切口部位，防止CFDA见光分解；

(2.3)将处理后的离体百合鳞茎置于原培养基中，并以原培养条件继续培养72h；

(3)采样和制备切片

将百合离体植株从培养基中取出，洗净并擦干后，在拟观察部位取样；

用双面剃须刀片对取样进行徒手切片操作，切片立即置于滴有80％甘油液滴的载玻片；使切片平铺在载玻片的中央，盖上盖玻片；

(4)观察与拍照

用荧光显微镜观察羧基荧光素在切片内的分布图像，根据观察对象调整目镜和物镜倍数，对观察到的样本进行拍照。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述CFDA荧光染料溶液中，溶质为5(6)羧基荧光素酯，溶剂为丙酮，或者溶剂为DMSO与纯水1∶1体积比的混合液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所用医用药棉需经过121℃高温灭菌。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中在取样时，拟观察部位是植株的鳞片、鱗茎盘、根或叶片。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中在取样时，直接对植株的拟观察部位徒手横切或纵切，制备徒手切片；取样的切片大小为0.2cm×1cm×2cm。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中在观察时，采用488nm激光激发，并以蓝色滤光片检测图像。