[发明专利]一种鲍曼不动杆菌的特异基因及其引物和应用

说明书

本发明属于分子生物学技术领域，提供了一种鲍曼不动杆菌的特异基因及其引物和应用，所述特异基因为hypothetical protein，其核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，设计的PCR扩增引物对，上游引物如SEQ ID NO：1所示，下游引物如SEQ ID NO：2所示；环介导等温扩增引物，外游引物如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，内游引物如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；利用上述引物，采用PCR或环介导等温扩增的方法检测鲍曼不动杆菌。本发明对环境样本检测准确、便捷，检测方法特异性好，灵敏度高。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种鲍曼不动杆菌的特异基因及其引物和应用。

背景技术

鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)为非发酵革兰阴性杆菌，属于条件致病菌。鲍曼不动杆菌属于不动杆菌属，且广泛分布于外界环境中，主要在水体和土壤中，易在潮湿环境中生存，如浴盆、肥皂盒等处。该菌粘附力极强，极易于附着在人们生活的环境中。此外，鲍曼不动杆菌还存在于健康人皮肤(25％)、咽部(7％)，也存在于结膜、唾液、胃肠道及阴道分泌物中。

2015年某研究团队在广州地铁7条线路上使用棉试纸法采集了320个样本，这些样本主要来自地铁内的自动售票机、上下扶梯、座椅、吊环、竖杆等乘客常触碰位置，通过分离培养和分子检测，检测出2.5％的样本含有超级细菌——耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。这种较高的细菌检出率可能跟人的活动、动物、环境都有关系。该发现进一步增加了政府机构对公共环境卫生的重视程度，对相关公共基础设施的消毒越来越严格。

作为最常见的条件致病菌之一，鲍曼不动杆菌在环境中的存在情况也是一个我们值得重视的课题。目前常用的鲍曼不动杆菌的检测方法主要包括细菌分离鉴定、免疫学方法、分子生物学检测方法等，但这些方法都存在一定的缺陷。传统的检测方法主要采用细菌前增菌培养、分离培养、菌落形态观察和一系列的生化鉴定以及血清型鉴定等步骤，一般需4至7天，操作繁琐，费时耗力；免疫学方法也存在着易污染，交叉反应比较严重、假阳性多、灵敏度偏低等缺点。随着分子生物学和生物信息学的发展，陆续发现了一些病原菌保守的核酸序列，在此基础上建立了众多的检测技术。其中主要有核酸探针检测技术、实时荧光PCR检测技术、环介导等温扩增技术(LAMP)和PCR技术，这些方法因其特异性强、灵敏度高、省时等特点已越来越多的被应用于微生物鉴定中。但是用于对自然环境尤其是医院环境的检测和监测罕见报道。

发明内容

针对以上技术问题，本发明提供了一种鲍曼不动杆菌的特异基因及其引物和应用。

本发明利用生物信息学的方法寻找出鲍曼不动杆菌的特异基因，并针对该特异基因设计引物，以环境样本为对象，分别建立了PCR和LAMP两种鲍曼不动杆菌的检测方法，实现了简便、快速、准确的检测出鲍曼不动杆菌的目的。

本发明的技术方案：本发明提供了一种鲍曼不动杆菌的特异基因，所述特异基因为hypothetical protein，其核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。

本发明还提供了一种用于PCR扩增前面所述鲍曼不动杆菌特异基因的引物对，所述引物对中，上游引物如SEQ ID NO：1所示，下游引物如SEQ ID NO：2所示。

本发明还提供了一套用于环介导等温扩增前面所述鲍曼不动杆菌特异基因的引物，所述外游引物如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，所述内游引物如SEQ ID NO：3和SEQID NO：4所示。

本发明还提供了一种用于检测前面所述的鲍曼不动杆菌的试剂盒，包含前面所述的任一组引物。

本发明还提供了一种检测鲍曼不动杆菌的方法，

用前面所述的PCR扩增引物对对待测菌种基因组DNA进行PCR扩增，然后琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，出现目的条带，则是鲍曼不动杆菌；没有目的条带，则不是鲍曼不动杆菌。