[发明专利]一种畜肉中左旋咪唑含量的检测方法

说明书

本发明涉及一种畜肉中左旋咪唑含量的检测方法。所述的畜肉中左旋咪唑含量的检测方法.采用超声提取法以及同位素稀释技术，超高压液相色谱‑串联质谱法测定畜肉中左旋咪唑的方法。

技术领域

本发明涉及一种畜肉中左旋咪唑含量的检测方法。

背景技术

左旋咪唑（levamisole）为抗蠕虫药，最常用的兽药制剂形式为左旋咪唑盐酸盐（levamisole hydrochlorideh）。盐酸左旋咪唑主要用于治疗畜禽胃肠道线虫、肺线虫病和猪肾虫病，在畜牧业中广泛应用。不合理地使用左旋咪唑会造成动物产品中残留，残留的左旋咪唑对人体的主要潜在危害是致畸作用和致突，变作用。为保证动物源性产品的安全性，美国、加拿大、欧盟和日本等许多国家或国际组织制定了严格的限量标准，一般为 10～100μg/kg。我国规定牛羊、猪、禽产品中左旋咪唑最大残留限量（MRL）为 10μg/kg。目前，左旋咪唑残留检测方法以色谱法为主，主要有液相色谱-紫外检测法和气相色谱-氮磷检测法，这些方法的检出限在10～100μg/kg，且操作较为复杂繁琐。随着世界各国对左旋咪唑残留限量的规定越来越严厉，普通的色谱检测方法已逐渐不能完全满足其残留的检测要求。因此有必要进行改革创新。

发明内容

本发明的目的是提供一种畜肉中左旋咪唑含量的检测方法, 本发明的目的是通过如下技术方案来实现的:

本发明的畜肉中左旋咪唑含量的检测方法,包括以下步骤：

（一）待测物质的提取

称取待测均匀样品2.0g于50mL聚丙烯塑料离心管中，加入40μL内标（100ng/mL），再加入10mL乙腈，于30℃水浴下超声提取30 min。提取结束后， 4500 转/min的转速离心5 min。

（二）提取液的净化

取步骤（一）离心后所得上层提取液5 mL过活化后的HLB固相萃取柱净化（分别用3.0mL乙腈、3mL超纯水活化），收集流出液与5mL玻璃试管中。

（三）提取液的浓缩

将步骤（二）所收集的洗脱液于45℃水浴下氮吹至近干，加入10%乙腈含0.2%甲酸溶液溶解定容至1.0mL，涡旋混匀后过0.22μm滤膜，UPLC-MS-MS分析测试。

（四）仪器条件

色谱柱： BEH C₁₈柱（150 mm×2.1 mm，1.7μm，Waters公司）；柱温：40℃；流速为0.3mL/min；流动相为(A)0.3%甲酸；(B)乙腈；进样方式：梯度洗脱，梯度洗脱程序如表1所示。进样体积：2.0μm。

表1 流动相的梯度洗脱表

质谱参数：电喷雾电离负离子模式（ESI-）；毛细管电压：3000 V；干燥气温度：160℃；干燥气流速：16L/min；雾化气压力：30 psi；鞘气温度：350 ℃；鞘气流速：12 L/min；扫描模式：多反应监测（MRM）；左旋咪唑的质谱参数见表2。

表2 质谱参数

注：*为定量离子

（五）本发明所述的左旋咪唑结构为,分子量为204.29，CAS号为：14769-73-4。

（六）标准曲线的制备