[发明专利]一株产纤溶酶的凝结芽孢杆菌及纤溶酶和活菌片剂的制法

说明书

本发明提供了一株产纤溶酶的凝结芽孢杆菌HQ‑1，该凝结芽孢杆菌HQ‑1保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为：CGMCC No.16058，分类命名为：凝结芽孢杆菌Bacillus coagulans。本发明还提供了利用该菌制备纤溶酶和活菌片剂的方法。本发明所得的凝结芽孢杆菌具有良好的药敏性、抑菌性和对酸碱环境的耐受能力；本发明所得的凝结芽孢杆菌所产的纤溶酶活性高，可达383.1U/mL；本发明所得活菌片剂制备方法简单，活菌率高，具有良好实际应用前景。

技术领域

本发明属于微生物及酶工程技术领域，具体涉及一株产纤溶酶的凝结芽孢杆菌及纤溶酶和活菌片剂的制法。

背景技术

血栓病(thrombotic disease，TD)是当前危害人类健康、死亡率最高的疾病之一。溶栓治疗是目前针对此类疾病最常用且最疗效的治疗手段之一。然而，现行临床应用的溶栓药物一方面远不能满足市场需求，还存在分解纤维蛋白特异性低、体内半衰期短、易引起出血和价格昂贵等缺点。因此，世界各国都在致力于开发显效、无毒副作用、价廉的新溶栓药物，寻找天然来源的纤溶酶也成为了研究的热点。

微生物因其物种丰富、繁殖快以及易于应用于工业生产是备受关注的溶栓药物的重要来源。目前，产纤溶酶菌株主要是来源于豆豉、酱等传统发酵食品和土壤、海泥等自然环境，经鉴定这些菌株大多为枯草芽孢杆菌属、金黄色葡萄球菌、霉菌和放线菌等，其中枯草芽孢杆菌产纳豆激酶已经商业化。然而，这些菌均为不能在食品中直接使用的菌株，所以限制了具纤溶酶功能性食品的开发。

目前关于乳酸菌产纤溶酶的研究较少。由于兼具乳酸菌和芽孢菌共同的特点，以及良好的安全性，凝结芽孢杆菌自1989年被美国FDA认可其为“普遍认为安全(GRAS)”的杆菌，还获得了欧洲欧盟食品安全局(EFSA)的安全资格认定(QPSS)，至今仍被评定为缺乏产毒潜能，并且在国家卫生计生委发布的2016年《关于发酵乳杆菌CECT5716等3个菌种的公告》中被列入《可用于食品的菌种名单》。

发明内容

针对现有技术的缺点，本发明的目的之一在于一株产纤溶酶的凝结芽孢杆菌HQ-1，所述凝结芽孢杆菌HQ-1保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为：CGMCC No.16058，分类命名为：凝结芽孢杆菌Bacillus coagulans。

本发明的另一个目的在于提供所述凝结芽孢杆菌HQ-1生产纤溶酶的方法，所述方法包括如下步骤：

将所述凝结芽孢杆菌HQ-1接种至培养基中进行发酵培养，至芽孢形成率达到90％以上时结束发酵，取发酵上清液，经纯化后获得纤溶酶。

作为一种可选的技术方案，所述培养基为MRS液体培养基。

作为一种优选的技术方案，进行发酵培养时，发酵条件为：温度37℃、摇床转速200r/min、发酵时间24-48h。

在进行发酵培养前，将凝结芽孢杆菌HQ-1进行活化并制备种子液。

作为一种可选的技术方案，所述活化的方法为：将所述凝结芽孢杆菌HQ-1接种到MRS液体培养基中，于37℃培养16h，按3％接种量转到12％脱脂乳液体培养基中，于37℃培养至凝乳，重复2-4次以恢复菌株活力；和/或，所述种子液的制备方法为：进行活化后，按接种量3％的比例接入MRS液体培养基，于37℃培养16h，得到种子液。

本发明还有一个目的在于提供由上述方法制备得到的纤溶酶。

本发明还有一个目的在于提供包含上述凝结芽孢杆菌HQ-1的活菌片剂，所述活菌片剂包括所述凝结芽孢杆菌HQ-1的菌粉和药学上可用的辅料。

作为一种优选的技术方案，所述辅料按重量比30:0.7:15:10:20计，为乳糖、硬脂酸镁、β-环糊精、海藻多糖和麦芽糊精的混合物。