[发明专利]一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法

权利要求书

1.一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、取螺旋藻与提取剂混合后进行研磨至少30min，再采用超声波破碎，加入离心机中离心得到第一次提取液与沉淀，待用；

步骤二、将步骤一中的沉淀与提取剂混合后进行超声波破碎，加入离心机中离心得到第二次提取液，将第二次提取液与第一次提取液混合得到提取液，待用；

步骤三、向所述提取液中加入质量分数为40%的硫酸铵溶液进行高速离心，高速离心后取上清液，再向上清液中加入硫酸铵使得溶液中硫酸铵的质量分数为55%以上，中速离心后取沉淀，待用；

步骤四、向步骤三中的沉淀中加入溶解剂进行溶解后高速离心，离心后的上清液采用微孔滤膜进行过滤，将滤液再加入双水相体系中进行分离，再经过离子交换柱进行纯化得到高纯度藻蓝蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤一中螺旋藻与提取剂的添加重量比为1：（3-5），超声波破碎的时间为10-12min，超声温度为0-4℃，离心转速为12000-15000r/min，离心时间为30-40min，离心温度为0-4℃。

3.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤二中沉淀与提取剂的添加重量比为1：（1.5-2.0），超声波破碎的时间为3-5min，超声温度为0-4℃，离心转速为12000-15000r/min，离心时间为15-20min，离心温度为0-4℃。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述提取剂为0.1-0.5mol/L的磷酸缓冲液，所述磷酸缓冲液的pH为7.0。

5.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤三中高速离心转速为12000-15000r/min，高速离心时间为30-40min，中速离心转速为8000-10000r/min，中速离心时间为30-40min。

6.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤四中沉淀与溶解剂的添加重量比为1：（2.0-2.5），高速离心的转速为12000-15000r/min，高速离心时间为30-40min，高速离心温度为0-4℃。

7.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述溶解剂为0.001-0.005mol/L的磷酸缓冲液，所述磷酸缓冲液的pH为7.0。

8.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤四中微孔滤膜的孔径为0.22μm。

9.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤四中双水相体系中聚乙二醇的质量分数为12.28%，双水相体系中磷酸缓冲液的质量分数为11.63%。

10.根据权利要求9所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述磷酸缓冲液的摩尔浓度为0.001-0.005mol/L。