[发明专利]新城疫鸡胚接种免疫液的制备方法

说明书

本发明公开了一种新城疫鸡胚接种免疫液的制备方法，包括如下步骤：（1）、采集发病鸡场病死鸡的内脏器官，置于‑20℃冰箱冷冻，冻硬后取出融化，待完全融化后再次冷冻，如此反复循环3次；（2）、取1g组织混合物置于无菌研钵中研磨，加入1000mL的生理盐水，研磨至匀浆状后8000rpm离心，取上清液；（3）、将上清液使用PCR方法鉴定，确定为新城疫病毒；（4）、将上清液使用0.22μm的滤膜过滤后，分别接种于营养琼脂和鲜血琼脂检测其是否含有细菌。将免疫液接种于孵化至12日龄的受精蛋中，这样孵化出的鸡就具有更高的抗体水平，提升其对新城疫病毒的免疫力。

技术领域

本发明属于禽类疫苗制备领域，具体为一种新城疫鸡胚接种免疫液的制备方法。

背景技术

新城疫（newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（NDV）引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。发病鸡和隐性感染鸡是本病的主要传染源，病鸡可以通过口、鼻分泌物和粪便将病毒排出。病毒在病鸡所有组织器官、体液、分泌物和排泄物中。病毒可经消化道、呼吸道，也可经眼结膜、受伤的皮肤和泄殖腔黏膜侵入机体。病毒能够感染多种禽类，鸡最易感。本病一年四季均可发生，但以冬春天气寒冷季节发病较多。鸡场的鸡群一旦感染发病后，可于4～5d波及全群。具有较高的发病率和病死率，是当前危害养鸡业的一种主要传染病之一。世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类疫病。我国列入重大传染病，也是禽类重点防控的传染病之一。新城疫主要是通过疫苗接种来防控，通常是雏鸡在出壳后一周进行疫苗的接种，接种后再过20d后才能产生抗体，也就是在1月龄雏鸡体内的免疫力主要依靠母源抗体。如果母源抗体水平较低，则雏鸡就得不到有效的保护。随着病原的变异，新城疫病毒的毒力在不断的增强，这就要求雏鸡能有足够高的抗体水平来抵御强毒的感染。

基于上述情况，申请人研究出新城疫鸡胚接种免疫液进行超前免疫，可以给雏鸡提供足够的免疫力。

发明内容

针对新城疫鸡胚接种免疫液进行超前免疫，本发明目的是提供一种新城疫鸡胚接种免疫液的制备方法。

本发明是采用如下技术方案实现的：

一种新城疫鸡胚接种免疫液的制备方法，包括如下步骤：

（1）、采集发病鸡场病死鸡的内脏器官，置于-20℃冰箱冷冻，冻硬后取出融化，待完全融化后再次冷冻，如此反复循环3次；

（2）、 取1g组织混合物置于无菌研钵中研磨，加入1000mL的生理盐水，研磨至匀浆状后8000rpm离心，取上清液；

（3）、将上清液使用PCR方法鉴定，确定为新城疫病毒；

（4）、将上清液使用0.22μm的滤膜过滤后，分别接种于营养琼脂和鲜血琼脂检测其是否含有细菌；

（5）、取无菌的上清液注射于10日龄的SPF鸡胚尿囊腔中，于37℃孵化器内孵化；

（6）、将在孵化器中培养120h未死亡的鸡胚取出，用灭菌注射器吸出尿囊液，通过血凝试验检测尿囊液中的含毒量；当病毒效价低于2⁴时，则需要使用透析袋对尿囊液进行浓缩；当病毒效价高于2⁴时，使用灭菌生理盐水对其进行稀释；将病毒效价为2⁴的病毒尿囊液吸入灭菌容器里，-20℃冻存备用；

（7）、将病毒效价调至为2⁴的尿囊液接种于1日龄SPF鸡脑内，观察8日内的发病和死亡情况，如没有发病和死亡，或在最后一天内出现个别发病和死亡，则尿囊液符合要求，否则弃去；

（8）、将病毒效价为2⁴的尿囊液进行稀释，将尿囊液病毒效价稀释为2²时尿囊液即为免疫液，置于-20℃保存，备用。