[发明专利]一种生防用甲基营养型芽孢杆菌菌株及其用途

说明书

本发明公开了一种生防用甲基营养型芽孢杆菌菌株(Bacillus methylotrophicus)及其应用，该菌Bacillus methylotrophicus BCN2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No：16443。本发明包括菌株的分离培养及16S rDNA分子鉴定；甲基营养型芽孢杆菌挥发性物质对枇杷表面常见的腐败真菌(尖孢镰刀菌、葡萄座腔菌属、深绿木霉、胶孢炭疽菌、扩展青霉)在双区平板和枇杷果品上有效的抑制效果；该挥发性物质在枇杷贮藏中的防腐应用。利用甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)BCN2产生的挥发性抑菌物质可不直接接触果品，实现对果品的保鲜，延长食品的储存时间，可用于制备抑制尖孢镰刀菌、葡萄座腔菌属、深绿木霉、胶孢炭疽菌、扩展青霉等腐败菌，具有较宽抑菌谱的生防用保鲜剂。

技术领域

本发明涉及一类由甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)BCN2 产生的挥发性抑菌物质及其对枇杷采后病害进行防治的生物技术领域，属于食品保鲜技术领域。

背景技术

水果采后病害导致的巨大损耗已成为国内外关注的问题，在发达国家约有 10％-30％的新鲜果品由于采后病害导致腐烂损失，在发展中国家果品的采后腐烂更为严重。目前，水果采后病害的防治方法主要有化学杀菌剂、气调贮藏、低温防病、热处理等，其中化学防腐效果最好。生物防治没有化学防腐保鲜带来的环境污染、农药残留及连续使用产生抗药性的问题，因此其成为果蔬采后病害防治的主要手段。水果采后腐败主要由霉菌等微生物污染引起，引起枇杷腐败的真菌主要有青霉、链格孢菌、灰葡萄孢菌、炭疽真菌等。

芽孢杆菌是目前生防用细菌中研究较多的一类，因其能够产生耐热、耐旱、抗紫外线和有机溶剂的内生孢子，所以是理想的生防用筛选对象。芽孢杆菌可以产生一系列的挥发性物质(VOCs)，包括醇类，醛类，胺类，酮类，萜类，芳香族和氯化烃类以及含硫化合物。有许多研究者发现芽孢杆菌这些挥发性化合物对霉菌有显著的拮抗作用。黄福兴等研究发现，枯草芽孢杆菌BS-2所产生的挥发性物质对木霉Trichoderma菌丝的生长及孢子萌发有显著的抑制作用^[1]。挥发物的生防用作用机制主要为改变霉菌蛋白质表达和特定酶的活性或通过增加细胞膜的通透性，从而降低膜相关酶的活性和减少营养摄取。

甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)是MunusamyMadhaiyan等人2010年报道自水稻根系土壤中分离得到的一个新种^[2]；殷晓敏等人报道甲基营养型芽孢杆菌培养发酵液能导致西瓜尖孢镰刀菌分生孢子不能正常萌发，失去致病力，病菌菌丝体畸形膨大从而不能侵染寄主植株^[3]；甲基营养型芽孢杆菌在防治番茄早疫病和稻白叶枯病的研究已有报道^[4-6]，如吕倩等首次从海洋中分离得到并证实此菌具备较强抑制黄瓜炭疽病菌等病原真菌活性的能力，有防治作物真菌病害的利用潜质^[6]。但关于甲基营养型芽孢杆菌产生的挥发性物质很少被报道。本发明将利用甲基营养型芽孢杆菌产生的挥发性物质的拮抗性，制备一种防治枇杷采后腐败的制剂。

参考文献：

[1]黄福兴.枯草芽孢杆菌BS-2对病原真菌的抑制作用及其活性成分分析 [D].福建农林大学,2008.

[2]朱玮,赵兵,王晓东,等.生物农药苏云金芽孢杆菌的研究进展[J].过程工程学报,2004,3:282-288.

[3]殷晓敏,吴琼,金志强.甲基营养型芽孢杆菌对西瓜枯萎病菌拮抗作用的研究[J].热带农业科学,2017,11:54-60.

[4]刘利强,杨士玲,陈强,等.30亿个/g甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂防治黄瓜灰霉病田间药效试验[J].现代农业科技,2014,9:130-133.