[发明专利]一种从卷柏属植物中提取分离高纯度穗花杉双黄酮的方法

说明书

本发明公开了一种从卷柏属植物中提取分离高纯度穗花杉双黄酮的方法，本发明采用非极性大孔吸附树脂作为分离材料，采用含水乙醇‑pH梯度洗脱工艺，从卷柏属植物醇提液中分离得到穗花杉双黄酮粗品，进一步通过碱性甲醇溶解酸沉及乙醇重结晶工艺分离得到高纯度的穗花杉双黄酮，含量98％以上，工艺转移率50％以上。

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种从卷柏属植物中分离纯化高纯度穗花杉双黄酮的方法。

背景技术

穗花杉双黄酮(Amentoflavone)又称阿曼托双黄酮，广泛存在于卷柏属(Selaginella)植物中。药理研究表明穗花杉双黄酮具有抗炎、抗病毒、抗癌、降血糖和神经保护等药理活性。穗花杉双黄酮作为药用原料开发与应用具有重要研究价值。卷柏属植物卷柏S.tamariscina、及江南卷柏S.moellendorffii中穗花杉双黄酮含量较大(0.4～1.4％)，结构类似物较为复杂，研究开发一个工业化从卷柏属植物中制备分离高纯度药用原料穗花杉双黄酮的制备工艺具有重要应用价值。

目前，文献报道的提取分离穗花杉双黄酮的方法很多，如，赖红芳等发表的《大孔树脂纯化翠云草中穗花杉双黄酮的工艺》(江苏农业科学，2018，46(7):201-204)比较了8种不同型号的大孔吸附树脂对穗花杉双黄酮的吸附性质，结果表明，极性大孔吸附树脂NKA-9比较适用于穗花杉双黄酮的纯化，最佳纯化工艺为90％(v/v)乙醇洗脱，洗脱7个柱体积，分离纯化后的穗花杉双黄酮的回收率达64.26％。但用该方法并未得到高纯度穗花杉双黄酮单体化合物。

已公开专利“一种穗花杉双黄酮的制备方法”(中国，专利号：CN 101585825 A；公布日：2009.11.25)以卷柏干燥全草为起始原料，用有机溶剂和水进行提取，并且采用硅胶柱层析和Sephadex LH-20柱层析分离法进行分离得到纯度在95％以上穗花杉双黄酮，但该方法用到硅胶柱层析和Sephadex LH-20柱层析，一方面工艺步骤繁琐，生产周期较长，另一方面生产成本较高，不易于工业化生产。

已公开专利“一种分离纯化穗花杉双黄酮的方法”(中国，专利号：CN 102229590A；公布日：2011.11.02)，将卷柏加水或其他极性溶剂回流提取，所得到的提取物采用石油醚、乙酸乙酯、丙酮和水的混合溶液作为溶剂体系，经制备型高速逆流色谱仪进行分离纯化得到穗花杉双黄酮。该方法能得到高纯度的穗花杉双黄酮产品，但该方法一次只能制备少量穗花杉双黄酮产品，高速逆流设备成本较高，不易工业化生产。

已公开专利“一种穗花杉双黄酮的纯化方法”(中国，专利号：CN 103694212 A；公布日：2014.04.02)，将卷柏加热加水提取，弃去水提液，收集卷柏药材，然后加入甲醇或乙醇，回流提取，收集醇提取液，减压浓缩，浓缩液离心，收集沉淀物，用溶剂油或石油醚搅拌脱脂，过滤，收集滤饼，干燥，得到卷柏总黄酮提取物，用甲醇或乙醇溶解，上样于强极性大孔吸附树脂ADS-7，用0.5～2％(v/v)盐酸洗脱，得到的洗脱液调pH4～6后，浓缩，静置析晶，得到的晶体再用甲醇或乙醇进行重结晶，得到纯度在95％以上的穗花杉双黄酮。该方法得到卷柏总黄酮提取物过程繁琐，且使用易燃易爆有机溶剂。

发明内容

本发明目的是提供一种从卷柏属植物中提取分离高纯度穗花杉双黄酮的方法，药材用含水醇溶液进行提取，提取液浓缩，后续步骤采用大孔吸附树脂柱层析，含水乙醇-pH梯度洗脱及碱性甲醇溶解酸沉和重结晶方法，从卷柏属植物中提取分离得到高纯度穗花杉双黄酮，含量98％,符合工业化生产技术特点。

本发明采用的技术方案是：

一种从卷柏属植物中提取分离穗花杉双黄酮的方法，所述方法如下：

(1)药材提取：将卷柏属药材，粉碎，加体积百分比70～95％乙醇水溶液回流提取或50～80℃温浸搅拌提取，提取2～3次，每次提取1～3hr，合并醇提液，减压回收溶剂，得卷柏属药材醇提浓缩液；