[发明专利]一种靶向人N-cadherin蛋白的多肽及其应用

说明书

本发明提供一种靶向人N‑cadherin蛋白的多肽及其应用。所述多肽的序列具有通式为X₁SX₂X₃RX₄X₅X₆的氨基酸序列，其特异性地识别并结合N‑cadherin蛋白，与N‑cadherin蛋白的亲和力强，且无免疫原性，本发明的多肽、含有该多肽的偶联物、由该多肽形成的二价体或多价体可用于制备肿瘤的诊断试剂及治疗药物；另一方面，含有本发明多肽的磁性纳米颗粒还可以用于富集、分离和检测循环肿瘤细胞，本发明多肽在肿瘤诊断和治疗领域具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种靶向癌细胞EMT过程的多肽，和由该肽所衍生的且能与人间质细胞标记物N-钙粘蛋白(N-Cadherin)结合的产品及上述多肽或其衍生的产品在捕获循环肿瘤细胞中的应用。

背景技术

恶性肿瘤严重威胁着人类的健康与生命，而早期筛查和精准诊治可有效提高生存率。目前，液体活检成为可能改变癌症诊疗的新技术，其中循环肿瘤细胞(CirculatingTumor Cells，CTCs)是最受瞩目的研究对象。CTCs是指从原位实体瘤或转移灶释放进入外周血的肿瘤细胞。由于携带完整的细胞膜、蛋白质以及基因信息，CTCs的检测与分析成为目前最具发展潜力的肿瘤无创诊断和实时疗效监测技术，对于肿瘤早期诊断、预后评估及耐药提示都极为重要。目前主流的CTCs富集方法是以上皮来源的细胞粘附分子(EpCAM)为靶标，利用抗原-抗体作用原理，通过免疫磁珠进行捕获并计数。然而，由于CTCs从组织进入血液与上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程密切相关，此时，上皮源性标记物下调而间质源性标记物上调。因此，单纯选取EpCAM为靶标会导致发生间质转化的CTCs丢失，难以保证CTCs的富集效率。

上皮-间质转化(EMT)过程是肿瘤进展过程中一个重要的事件，肿瘤细胞失去上皮极性转而获得成纤维细胞样的表型。越来越多的研究证实钙粘蛋白的异常表达或钙粘蛋白间的相互转化，是乳腺癌EMT过程中的关键进程。神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)是一种依赖于Ca²⁺的细胞表面黏附分子，是细胞间黏连的主要结构成分，其主要功能是介导细胞间的粘附和迁移。因此，选择亲水性好，舒展性强，距胞膜较远的结构域作为靶点有利于多肽与蛋白的识别。乳腺癌，肝癌和子宫颈癌等多种肿瘤中都有间质标志物N-cadherin的过度表达，其已经成为癌症转移的重要靶标。目前，针对EMT过程的靶向诊断和治疗药物主要是抗体药物。虽然其具有特异靶向性，但也存在着制备繁琐，稳定性差，费用昂贵，穿透力弱等缺点。因此，为了提高对肿瘤转移诊断和治疗的特异性和准确性，弥补抗体的缺陷，迫切需要寻求针对乳腺癌EMT过程标志物设计小分子探针，以作为检测和治疗乳腺癌的有效方法。

肽库筛选就是在大量肽段中寻找具有特定结合功能的小分子多肽。目前肽库筛选方法包括噬菌体展示肽库和化学合成肽库筛选。经典的组合化学肽库构建方法之一是在固相合成中，通过对载体微珠的多次混合与均分，使每个微珠上带有唯一的一种随机多肽序列，称之为“一珠一物”肽库，因合成灵活性高，稳定可靠而在亲和筛选方面独具优势。

多肽类靶向小分子药物及诊断探针以成本低、分子量小、生物相容性好、穿透性强、无免疫原性、制备简单等特点，在肿瘤靶向给药、癌症诊断等方面彰显出很强的优越性，甚至显示了替代抗体类诊疗试剂的趋势。因此，在乳腺癌研究中针对肿瘤间质标志物合理设计并筛选对乳腺癌细胞的高特异亲和多肽，继而发展成为肿瘤的诊断试剂及治疗药物，是解决上述难题的有效途径。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种靶向人N-cadherin蛋白的多肽及其应用。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：