[发明专利]一种用于辅助诊断SCA3/MJD的外泌体生物标志物及其筛选鉴定方法

说明书

本发明公开了一种用于辅助诊断SCA3/MJD的外泌体生物标志物及其筛选鉴定方法，属于细胞和分子生物技术领域。本发明通过在SCA3/MJD患者血浆及脑脊液外泌体中提取总RNA，应用Small RNA Sequencing（sRNA seq）筛选和鉴定差异性表达的miRNAs，并结合实时荧光定量PCR（Quantitative Real‑time PCR,qPCR）验证，证实了novel‑mir‑7014可作为指导SCA3/MJD临床分型及反映疾病严重程度潜在的生物标志物，将为SCA3/MJD提供一种新的特异性的辅助诊断方法，在病情监测及辅助治疗上有潜在的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及细胞和分子生物技术领域，特别涉及一种用于辅助诊断SCA3/MJD的外泌体生物标志物及其筛选鉴定方法。

背景技术

遗传性脊髓小脑性共济失调（spinocerebellar ataxias，SCAs）是一类常见的神经系统退行性疾病，尤其以脊髓小脑性共济失调3型/马查多-约瑟夫病（spinocerebellarataxia type 3/Machado-Joseph disease, SCA3/MJD）最常见，在中国人群中该型几乎占SCAs患者的60-70%。有学者将SCA3/MJD分为以下5种亚型:1型：通常在20岁之前发病，进展迅速，以锥体束征(肌强直和肌痉挛)和锥体外系特征(运动迟缓和肌张力障碍)合并共济失调为主要表现；2型通常在20-50岁之间发病，以共济失调伴进行性眼外肌麻痹及锥体束征为主要表现；3型发病较晚，发病年龄多见于40 -75岁之间，以共济失调合并周围神经表现如运动神经病变及肌肉萎缩为主要特征；此外还有以帕金森症状为特点的4型及纯粹痉挛性截瘫为临床表现的5型。在这五个亚型中，2型最常见，其次是较为少见的3型、1型， 4和5更为罕见。SCA3/MJD的致病基因ATXN3的编码区内含有CAG重复序列，正常人的拷贝数约13-40，而患者因发生动态突变可扩增至51-86。除CAG重复序列拷贝数变异可解释患者50-60%的临床异质性外，修饰基因、表观遗传等因素也参与了调节。ATXN3基因编码蛋白—ataxin-3的羧基端含一段多聚谷氨酰胺（polyglutamine, polyQ）肽链，含有异常扩展polyQ肽链的ataxin-3蛋白可选择性在神经系统特定区域（小脑、脑干、脊髓等）积聚形成神经元核内包涵体并引起细胞死亡。由于其发病、临床分型、疾病进展等相关机制尚未完全阐明，尚无特效的治疗，致死率和致残率高，给患者、家庭和社会带来了沉重的负担。

外泌体（exosomes）作为备受关注的细胞间通讯媒介，为该类疾病的临床分型、疾病严重程度及可能发病机制等的探讨提供了新的思路。外泌体是由多种活细胞分泌的直径40-150nm的胞外囊泡，在脑脊液、血浆、尿液等体液都可以检测到外泌体的存在。外泌体包含非编码RNAs（miRNAs、lncRNAs等）、mRNAs、蛋白质等成分，可转运这些成分作用于靶细胞，发挥相应调控作用，是一种非常重要的细胞间物质和信息交流的载体。外泌体形态较小，易透过血脑屏障，存在免疫豁免，并能随体液转运而不易被吞噬细胞吞噬，具有检测损伤小、稳定性好、灵敏度高等诸多优点，提示外泌体可作为神经退行性疾病新的生物标志物及潜在的治疗载体的研究方向。

综上所述，寻求一种用于辅助诊断SCA3/MJD的外泌体生物标志物对辅助诊断和早期治疗SCA3/MJD具有重大意义。

发明内容

本发明要解决的关键技术问题是：克服现有技术的不足，提供一种用于辅助诊断SCA3/MJD的外泌体生物标志物及其筛选鉴定方法，为临床上SCA3/MJD早期诊断、早期治疗提供支持。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种用于辅助诊断SCA3/MJD的外泌体生物标志物，所述外泌体生物标志物为外泌体来源的含有如SEQ ID.1所示的核苷酸序列的miRNA。

进一步，所述miRNA为外泌体来源的novel-mir-7014。