[发明专利]一种血清尿素测定试剂及其应用

说明书

本发明提供了一种血清尿素测定试剂及其应用，所述试剂包括试剂R1和试剂R2；其中，所述试剂R1的原料包括Capso、NADH和EDTA.Na₂，所述试剂R2的原料包括HEPES、ɑ‑酮戊二酸、尿素酶、谷氨酸脱氢酶、EDTA.Na₂、还原剂和BSA；本发明通过优化试剂配方，调节缓冲液pH，提供了有效的缓冲能力，改善NADH的稳定性，减少了工具酶的氧化，各组分协同增效，解决了空白吸光度变化率稳定性欠佳的问题，提供了医院临床检测结果的可靠性，具备广阔的前景和巨大的市场价值。

技术领域

本发明属于生物领域，涉及一种血清尿素测定试剂及其应用。

背景技术

尿素(Urea)是机体蛋白质代谢的终末产物，分子量小且不与血浆蛋白结合，可自由滤过肾小球。当人体肾实质受损时，肾小球滤过率下降，血液中的尿素会升高，通过测定血液中尿素含量可以观察肾小球滤过功能。

目前，医院检测血清尿素的常用方法是酶偶联速率法，测定原理是：尿素在尿素酶作用下水解成NH4+和二氧化碳，NH4+、还原性辅酶Ⅰ(NADH)和ɑ-酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶作用下生成谷氨酸，同时NADH被氧化成NAD+,在340nm波长处吸光度下降，其吸光度下降速率与尿素含量成正比。

现有的酶偶联速率法尿素试剂盒在全自动生化分析仪试剂仓开瓶使用时，试剂空白吸光度变化率将会逐步升高，影响日常临床标本的检测结果可靠性，给临床诊断带来干扰。CN105950704A公开了一种血清中尿素氮肌酐双项同时测定的方法：试剂II中仅有肌酐酰氨基水解酶、肌酸脒基水解酶有效组分；试剂I中含有尿素酶、谷氨酸脱氢酶、α酮戊二酸、NADH有效成分。CN104198421A公开一种不受血清内源性氨干扰的测定尿素含量的检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2；试剂R1含1-500mmol/LpH＝3.0-8.0的缓冲液、1-80KU/L谷氨酸脱氢酶、0.5-2KU/LNADH、1-100mmol/Lα-酮戊二酸、1‰-5‰表面活性剂和0.1-1g/L防腐剂；试剂R2含1-500mmol/LpH＝3.0-8.0的缓冲液、1-60KU/L尿素酶、0.5-2KU/LNADH、1-100mmol/Lα-酮戊二酸、10-500mmol/L氯化钠、1-50mmol/L酶保护剂和0.1-1g/L防腐剂。但上述现有技术并没有解决试剂空白吸光度变化率将会逐步升高的问题。

因此，研发一种基于酶偶联速率法的试剂空白吸光度变化率稳定性好的尿素测定试剂和试剂盒，具有良好的市场应用前景。

发明内容

为解决现有技术的不足和满足市场的需求，本发明提供了一种血清尿素测定试剂及其应用，通过优化试剂配方，调节缓冲液pH，解决了空白吸光度变化率稳定性欠佳的问题，提供了医院临床检测结果的可靠性，具备广阔的前景和巨大的市场价值。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

第一方面，本发明提供一种血清尿素测定试剂，所述试剂包括试剂R1和试剂R2；其中，所述试剂R1的原料包括Capso、NADH和EDTA.Na₂，所述试剂R2的原料包括HEPES、ɑ-酮戊二酸、尿素酶、谷氨酸脱氢酶、EDTA.Na₂、还原剂和BSA。

优选地，所述还原剂包括含有羧基的还原剂，优选为巯基乙酸或N-乙酰半胱氨酸。

优选地，所述的尿素测定试剂在全自动生化分析仪上采用速率法进行测定，检测主波长为340nm。

优选地，所述试剂R1的pH为9.2-9.8，例如可以是9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7或9.8。

优选地，所述试剂R2的pH为6.3-6.9，例如可以是6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8或6.9。