[发明专利]一种5-苯基-1-(对甲基苯基)-1H-三唑与血清作用的差异蛋白检测方法

说明书

本发明涉及一种5‑苯基‑1‑(对甲基苯基)‑1H‑三唑与血清作用的差异蛋白检测方法，包括：将血清样品与5‑苯基‑1‑(对甲基苯基)‑1H‑1,2,3‑三唑化合物混合；除去高丰度蛋白；Bradford法定量测定蛋白浓度；进行双向电泳实验；胶片图像处理及质谱鉴定等步骤。本发明还提供一种5‑苯基‑1‑(对甲基苯基)‑1H‑三唑的制备方法。

技术领域

本发明属于有机合成及生物化学领域，具体涉及一种5-苯基-1-(对甲基苯基)-1H-三唑与血清作用的差异蛋白检测方法。

背景技术

1,2,3-三氮唑化合物以其独特的五元芳香含氮杂环结构，可与其他取代基相缀合或并合形成多种类型具有药物活性的衍生物，又表现出低毒性及良好的生物活性，已在材料化学、药物化学、有机化学和有机金属化学等许多领域有广泛的应用，并愈来愈受到研究者的青睐。而蛋白质组学是一门在蛋白质水平上认识生命机理的学科，其学术理念和相关技术方法已被广泛应用于生命科学的各个领域，涉及多种重要的生物学现象，并已成为人类重大疾病诊断、治疗和寻找药物靶点的有效方法之一。小分子药物的作用靶点通常是蛋白质，而蛋白质组学是一种应用化学小分子来检测整个目标蛋白质组的手段，从整体水平上，观察蛋白质组的变化，发现差异表达蛋白并研究它的的生物功能以及与小分子的作用机理，从而找到新的药物靶点或者发现具有药用价值的小分子。

人体血液中的蛋白质几乎与机体中所有的细胞、组织、器官有关，血液蛋白的动态变化可以直接反应机体的健康情况，是研究各类疾病相关标志物最有价值的标本。本发明化合物5-苯基-1-(对甲基苯基)-1H-1,2,3-三唑通过在模拟人生理温度条件下，进行血清与化合物相互结合的体外培养，并采用蛋白质组学研究方法结合MALDI-TOF-MS技术开展在化合物存在时的血清蛋白质组学研究，分析差异表达蛋白，寻找特定疾病的特异血清蛋白标志物或者发现新的疾病相关蛋白质，为疾病的诊断或治疗提供新的依据，为5-苯基-1-(对甲基苯基)-1H-1,2,3-三唑可能作为新药物的开发提供更加直观的理论基础。

发明内容

本发明提供一种5-苯基-1-(对甲基苯基)-1H-1,2,3-三唑与血清作用检测差异蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将血清蛋白与5-苯基-1-(对甲基苯基)-1H-1,2,3-三唑化合物溶液混合均匀得样品a，恒温培养得样品b；

(2)去除样品b中的高丰度蛋白得样品c

(3)用Bradford法对样品c的蛋白浓度进行定量。

(4)进行双向电泳实验：

①按每胶条蛋白质上样量1.3mg，上样总体积为455μL的标准水化上样，进行第一向等电聚焦；

②第一向等电聚焦完毕后，将胶条平衡后转到聚丙烯酰胺凝胶进行第二垂直电泳实验；

③电泳结束后进行考马斯亮蓝染色，脱色，保存，扫描分析；

(5)胶片图像处理及质谱鉴定

①凝胶图像分析，筛选出表达异常的蛋白点并做上标记；

②差异蛋白点的酶解及质谱鉴定；

(6)结果

利用ImageMaster5.0凝胶图像分析软件获得20个差异表达蛋白质点，再通过NCBInr的Blast的检索，确定了其中1-16、18-20号差异表达蛋白的信息(见下表)。