[发明专利]一种5-(4-甲氧基苯基)-1-苯基-1H-三唑与血清作用的差异蛋白检测方法

权利要求书

1.一种5-(4-甲氧基苯基)-1-苯基-1H-1,2,3-三唑与血清作用检测差异蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将血清蛋白与5-(4-甲氧基苯基)-1-苯基-1H-1,2,3-三唑化合物溶液混合均匀得样品a，恒温培养得样品b；

(2)去除样品b中的高丰度蛋白得样品c；

(3)用Bradford法对样品c的蛋白浓度进行定量；

(4)进行双向电泳实验

①按每胶条蛋白质上样量1.3mg，上样总体积为455uL的标准水化上样，进行第一向等电聚焦；

②第一向等电聚焦完毕后，将胶条平衡后转到聚丙烯酰胺凝胶进行第二垂直电泳实验；

③电泳结束后进行考马斯亮蓝染色，脱色，保存，扫描分析；

(5)胶片图像处理及质谱鉴定

①凝胶图像分析，筛选出表达异常的蛋白点并做上标记；

②差异蛋白点的酶解及质谱鉴定；

(6)结果

利用ImageMaster5.0凝胶图像分析软件获得21个差异表达蛋白质点，再通过NCBInr的Blast的检索，确定了其中1-6、8-10、12-13、15-18、21号差异表达蛋白的信息见下表，

2.权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中5-(4-甲氧基苯基)-1-苯基-1H-1,2,3-三唑化合物溶液为5-(4-甲氧基苯基)-1-苯基-1H-1,2,3-三唑化合物的甲醇溶液，样品a中5-(4-甲氧基苯基)-1-苯基-1H-1,2,3-三唑化合物的浓度为2.0×10^-3mol/L。

3.权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中恒温培养：温度为37℃，转速为r＝280rpm，时间为1h。

4.权利要求1所述的方法，其特征在于所述血清蛋白为人血清蛋白。

5.权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中去除高丰度蛋白的方法为按照AndyBio试剂盒要求去除高丰度蛋白。

6.权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(4)中胶条规格为24cm非线性IPG胶条IPG pH＝3～10NL。

7.5-(4-甲氧基苯基)-1-苯基-1H-1,2,3-三唑在与血清蛋白作用确定差异蛋白中的应用，其特征在于所述5-(4-甲氧基苯基)-1-苯基-1H-1,2,3-三唑的制备方法包括如下步骤：室温下，将叠氮苯与对甲氧基苯乙烯溶于有机溶剂中，加入SmI₂，搅拌反应2.5小时后得到5-(4-甲氧基苯基)-1-苯基-1H-1,2,3-三唑；所述有机溶剂为THF与HMPA体积比为1:1的混合溶液；叠氮苯、对甲氧基苯乙烯、SmI₂的摩尔比为1：1.1-1.3：2.0。