[发明专利]乙肝肝炎病毒功能性受体的组成以及相关应用

权利要求书

1.分离的蛋白质作为乙型肝炎病毒HBV或丁型肝炎病毒HDV的功能性受体的用途，所述分离的蛋白质为人NTCP蛋白或树鼩NTCP蛋白，所述人NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述树鼩NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.一种易受HBV或HDV感染的细胞，所述细胞中外源转入了编码人NTCP蛋白或树鼩NTCP蛋白的分离的核苷酸，所述人NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述树鼩NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.根据权利要求2所述的易受HBV或HDV感染的细胞，所述易受HBV或HDV感染的细胞在转入权利要求2中所述的核苷酸序列前是不易受HBV或HDV感染的细胞。

4.根据权利要求3所述的易受HBV或HDV感染的细胞，所述不易受HBV或HDV感染的细胞选自失去HBV或HDV感染敏感性的原代人肝细胞或原代树鼩肝细胞，人或树鼩肝癌细胞，小鼠或大鼠肝细胞。

5.根据权利要求3所述的易受HBV或HDV感染的细胞，所述不易受HBV或HDV感染的细胞为肝癌细胞Huh-7或HepG2。

6.根据权利要求2所述的易受HBV或HDV感染的细胞，所述易受HBV或HDV感染的细胞是外源转入编码权利要求1中所述的HBV或HDV的功能性受体的分离的核苷酸的小鼠或大鼠的肝细胞。

7.编码人NTCP蛋白或树鼩NTCP蛋白的载体在构建乙型肝炎病毒和/或丁型肝炎病毒感染的非人转基因动物模型中的应用，所述人NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述树鼩NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

8.建立乙型肝炎病毒感染和/或丁型肝炎病毒感染的非人转基因动物模型的方法，所述方法包括通过转基因技术将受体非人动物的原SLC10A1基因替换为表达外源人类SLC10A1基因或树鼩SLC10A1基因的基因敲入小鼠；或者所述方法包括首先基因敲除受体非人动物的SLC10A1基因，然后进一步改造成表达来自人类的SLC10A1基因、或来自树鼩的SLC10A1基因。

9.权利要求7所述的应用或权利要求8所述的方法，其中所述的非人转基因动物是非人哺乳动物。

10.权利要求7所述的应用或权利要求8所述的方法，其中所述的非人转基因动物是小鼠、大鼠、非人灵长类动物。

11.用于筛选治疗和/或预防HBV和/或HDV感染或感染相关疾病的药物的方法，所述方法包括使用权利要求2-6任一项限定的细胞或由权利要求8的方法建立的非人转基因动物模型。

12.用于筛选治疗和/或预防HBV和/或HDV感染或感染相关疾病的药物的方法，所述方法包括使用稳定表达人NTCP蛋白或树鼩NTCP蛋白的Huh-7或HepG2细胞系，所述人NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述树鼩NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

13.权利要求2-6任一项限定的细胞或由权利要求8的方法建立的非人转基因动物模型在筛选治疗和/或预防HBV和/或HDV感染或感染相关疾病的药物中的应用。

14.稳定表达人NTCP蛋白或树鼩NTCP蛋白的Huh-7或HepG2细胞系在筛选治疗和/或预防HBV和/或HDV感染或感染相关疾病的药物中的应用，所述人NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQID NO：1所示，所述树鼩NTCP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

15.用于治疗或预防哺乳动物乙型肝炎病毒和/或丁型肝炎病毒感染以及相关疾病的药物，所述药物阻止或减少NTCP的蛋白质表达，或者所述药物阻止或减少NTCP与HBV和/或HDV之间的相互作用，所述药物为siRNA，所述siRNA为选自如下的序列：

siRNA-1：5'-CUAUGUAGGCAUUGUGAUAdTdT-3'(SEQ ID NO: 4)，

siRNA-2：5'-GUGUUAUCCUGGUGGUUAUdTdT-3'(SEQ ID NO: 5)，

siRNA-3：5'-GGACAUGAAUCUCAGCAUUdTdT-3'(SEQ ID NO: 6)，

siRNA-4：5'-GGGCAAGAGCAUCAUGUUUdTdT-3'(SEQ ID NO: 7)，

siRNA-11：5'-GGGAAAUGGCACCUACAAAdTdT-3'(SEQ ID NO: 8)，

siRNA-405：5'-CACAAGUGCUGUAGAAUUAdTdT-3'(SEQ ID NO: 9)，

siRNA-406：5'-CUAUAAAGGCAUCGUGAUAdTdT-3'(SEQ ID NO: 10)，

siRNA-pool(4)：5'-GGAUCGUCCUCAAAUCCAAdTdT-3'(SEQ ID NO: 11)，

siRNA-pool(5)：5'-GGAGUCAGCCGGAGAACAAdTdT-3'(SEQ ID NO: 12)，

siRNA-pool(6)：5'-GGACAAGGUGCCCUAUAAAdTdT-3'(SEQ ID NO: 13)，

siRNA-pool(7)：5'-GGUGCUAUGAGAAAUUCAAdTdT-3'(SEQ ID NO: 14)。