[发明专利]一种利用工农业副产物固态发酵合成那他霉素的方法

权利要求书

1.一种用于褐黄孢链霉菌生产那他霉素的固态发酵培养基，其特征在于，所述培养基包括碳源、氮源、辅助碳源、蓬松载体和水，以麸皮为碳源，以油菜籽饼为氮源，以稻谷壳为蓬松载体，以工业甘油为辅助碳源，其中，所述碳源和氮源质量比为2：1，所述辅助碳源的质量占碳源、氮源、辅助碳源和蓬松载体的总质量的2-5％，所述蓬松载体的质量占碳源、氮源、辅助碳源和蓬松载体的总质量的2-5％；所述培养基中水的体积mL为碳源、氮源、辅助碳源和蓬松载体的总质量g的70％。

2.权利要求1所述固态发酵培养基的配制方法，其特征在于，所述方法包括：称取碳源和氮源置于培养容器中，加入干燥的蓬松载体，搅拌均匀，再加入辅助氮源，之后加入水使培养基中水的体积mL为碳源、氮源、辅助碳源和蓬松载体的总质量g的70％，搅拌均匀后，封口，高温灭菌。

3.根据权利要求2所述的配制方法，其特征在于，所述碳源和氮源在使用前需经过烘干和粉碎。

4.根据权利要求2所述的配制方法，其特征在于，所述高温灭菌的温度为126-136℃，灭菌时间为20-30min。

5.一种利用褐黄孢链霉菌发酵生产那他霉素的方法，所述方法利用权利要求1所述的固态发酵培养基或权利要求2-4任一项所述配制方法配制得到的固态发酵培养基对褐黄孢链霉菌进行发酵培养，即可得到发酵产物那他霉素。

6.根据权利要求5所述的一种利用褐黄孢链霉菌发酵生产那他霉素的方法，其特征在于，所述发酵过程中，发酵温度为28℃，接种量mL为培养基中碳源、氮源、辅助碳源和蓬松载体的总质量g的15％，发酵时间为7天。

7.根据权利要求6所述的一种利用褐黄孢链霉菌发酵生产那他霉素的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：

(1)发酵种子培养：将褐黄孢链霉菌接种于固体贝塔纳培养基上，在26-30℃恒温培养箱中培养直至长出褐黄色孢子；挑取孢子置于液体种子培养基摇瓶中，于26-30℃恒温振荡培养箱中培养1-3天；

(2)接种与发酵：按照接种量mL为培养基中碳源、氮源、辅助碳源和蓬松载体的总质量g的15％接种，将培养好的液体发酵种子接入已经配制完成的固态培养基中，搅拌均匀后，置于恒温培养箱中发酵培养7天；

(3)产物的提取与检测：固态发酵结束后，利用甲醇提取方法提取检测那他霉素含量。

8.根据权利要求7所述的一种利用褐黄孢链霉菌发酵生产那他霉素的方法，其特征在于，步骤(1)中所述固体贝塔纳培养基(g·L^-1)为：葡萄糖9-11，酵母粉0.5-2，蛋白胨1-3，琼脂18-21，pH 7.0-8.0；所述液体种子培养基(g·L^-1)为：葡萄糖18-22，酵母粉5-7，大豆蛋白胨5-7，NaCl 4-6，pH 7.0-8.0；

所述甲醇提取方法具体为：固态发酵结束后，发酵渣先置于35℃电热鼓风干燥箱中8h烘干，再于粉碎机中粉碎，过40目筛备用；以10mL 70％甲醇对以上0.3g发酵渣粉进行提取，提取过程于超声波清洗器中进行30min，此后于离心机中5000g离心10min，上清液用于检测那他霉素含量。