[发明专利]GSTP1基因SNP的荧光原位杂交测序检测方法

权利要求书

1.一种GSTP1基因SNP的荧光原位杂交测序检测方法，包括如下步骤：

(1)提取待测样本的DNA；

(2)以步骤(1)获取的DNA为模板，在dNTP、反应缓冲液、DNA切割剂存在的情况下，在寡核苷酸分子的引导下进行单链化衍生，所述寡核苷酸分子分为第一引导序列和第二引导序列，同时加入两条序列各异的测序探针，分别被定义为第一测序探针和第二测序探针，在所述两条探针的5’端分别被标记了彼此不同的荧光分子，在其3’端分别被标记了淬灭基团，所述第一引导序列、第二引导序列、第一测序探针和第二测序探针选自下列组合：

SEQ ID NO：1、2、5和6；或者

SEQ ID NO：3、4、7和8；

(3)对步骤(2)的单链化衍生物分别与第一测序探针和第二测序探针的杂交结果进行判读。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一测序探针标记的荧光分子为5-羧基荧光素,第二测序探针标记的荧光分子为六氯荧光素，所述淬灭基团为BHQ。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的待测样本为血液、体液、分泌物、代谢物、脱落物或组织样本。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述待测样本DNA模板浓度在10³个/uL以上。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)反应体系中第一引导序列与第二引导序列的比例为1:2-1:6，第二引导序列：第一测序探针：第二测序探针比例为1：1：1。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)反应体系中第一引导序列与第二引导序列的比例为1:4。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)反应体系中的dNTP为5mM，缓冲液为10×，所述切割剂为2.5U/μl的核酸外切酶。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述衍生及杂交的循环步骤为：

(1)预变性95℃，10分钟，1个循环；

(2)变性95℃，30秒，60℃～64℃退火进行杂交，75秒，共进行50-60个杂交循环。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述判读的方法为读取两种测序探针与单链化衍生物杂交测序后的荧光强度的St值之差。

10.一组用于检测GSTP1基因的单核苷酸多态性的核苷酸分子组合，所述组合包括单链化衍生中所用的定义为第一引导序列和第二引导序列的寡核苷酸分子、以及定义为第一测序探针和第二测序探针的杂交测序探针，所述第一引导序列、第二引导序列、第一测序探针和第二测序探针选自下列组合：

SEQ ID NO：1、2、5和6；或者

SEQ ID NO：3、4、7和8。