[发明专利]检测莲草直胸跳甲JHE基因转录水平的引物及方法

说明书

本发明提供了检测莲草直胸跳甲JHE基因转录水平的引物及方法，引物序列如SEQ ID NO.1‑2所示，本发明建立了莲草直胸跳甲雌雄虫取食不同CO₂浓度培育的空心莲子草后JHE基因表达量检测的荧光定量PCR法，并进行了转录组的测序，对JHE基因荧光定量的表达量趋势与转录组的表达量趋势做了比较，为研究莲草直胸跳甲受到环境胁迫时产生的防御机制及JHE基因转录水平奠定了基础。

技术领域

本发明涉及检测莲草直胸跳甲JHE基因转录水平的引物及方法，属于生物技术领域。

背景技术

莲草直胸跳甲属鞘翅目，叶甲科，是空心莲子草的主要生防天敌之一。GeorgeVogt于1962年首次发现了莲草直胸跳甲对空心莲子草有很好的控制作用。其后，莲草直胸跳甲在美国、澳大利亚等地被广泛应用于空心莲子草的控制，并取得了较好的防治效果。我国于1986年从美国引进莲草直胸跳甲，并应用于空心莲子草的生物防治，在四川、浙江、福建、广西等地取得一定的成功。

保幼激素酯酶(juvenile hormone esterase，JHE)，是大多数昆虫中最主要的一种降解保幼激素(Ju-venile hormone，JH)的特异性酯酶，对控制昆虫体内JH滴度起着重要的作用。在昆虫变态发育过程中，JHE适时出现，对幼虫正常发育成蛹非常重要，血淋巴中JHE活性很高时，能使JH滴度下降。在发育和生殖时JHE的降解作用有一定的时间特异性。JHE酶活力、含量以及分布因昆虫的种类、组织器官和发育时期不同而有差异。

昆虫变态的决定是在缺乏的条件下，由蜕皮激素作用，使合成幼虫型表皮向合成蛹型表皮转变等，促使幼虫变态化蛹，因此，JHE 对昆虫变态正常进行具有非常重要的作用，Abdel等研究表明 ，当终龄期出现 JHE的活性受到阻碍时，残存在血液及组织内的JH不能完全分解，导致幼虫化蛹的失败，使幼虫不能及时蛹化而形成巨大的幼虫。JHE是由脂肪体细胞和上皮细胞产生，它能够识别血淋巴中保幼激素-血淋巴保幼激素结合蛋白(juvenile hormone-hemolymph juvenile hormone binding protein，JH-hJHBP)复合体，将JH从复合体中分离出来溶到血淋巴中，再由JHE清除JH。JHE 对 JH 的分解具有特异性，不仅能分解游离状态的JH，而且对JH-hJHBP结合状态的 JH 也能特异地分解。Touhara 等研究表明，因为 JHE能识别JH-hJHBP复合体，因而能分解与hJHBP 成结合状态的JH，达到从血液及组织中迅速清除 JH作用。

关于莲草直胸跳甲JHE基因的表达等研究国内外未见报道，因此采用实时荧光定量PCR研究不同CO₂浓度处理下莲草直胸跳甲JHE基因的转录水平，结果表明，随着CO₂浓度的升高，雌雄虫JHE基因的表达量均升高，这与转录组表达量上调的变化趋势一致，说明CO₂浓度升高可以影响JHE基因的表达调控。昆虫保幼激素是一种昆虫生长调节剂 ，能通过干扰昆虫的正常发育而使其死亡 ，具有生物活性高，选择性明显，对人 、畜安全及对天敌、益虫无害，不污染环境等优点。脊椎动物和无脊椎动物的胚后发育和繁殖都是在内分泌的调控之下进行 ，对莲草直胸跳甲保幼激素酯酶的研究，旨在寻找高效、快捷、绿色的昆虫防治新方向。

发明内容

本发明的目的是提供检测莲草直胸跳甲JHE基因转录水平的引物及方法，为全面了解莲草直胸跳甲JHE基因的转录水平而设计的不同处理CO₂浓度。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

将取食不同CO₂浓度培育的空心莲子草的莲草直胸跳甲雌雄虫各采9只到Eppendorf管中，分为3个生物学重复，共12组样品。

设计一对检测莲草直胸跳甲JHE基因转录水平的引物，包括符合荧光定量PCR反应特点的上下游引物：

JHE-F：5`-GCCTATGGTAACTGGTCACAA-3`