[发明专利]一种以RHBDD1为靶点的抗肿瘤药物筛选模型及其方法

说明书

本发明公开了一种以RHBDD1为靶点的抗肿瘤药物筛选模型及其方法。具体地，本发明公开了一种以RHBDD1为靶点的抗肿瘤药物筛选模型，其包括RHBDD1蛋白或其截短体蛋白、荧光标记的底物短肽、脂质体转染试剂以及模型缓冲液。本发明还公开了一种建立以RHBDD1为靶点的抗肿瘤药物筛选模型的方法，其包括：a)加入RHBDD1蛋白或其截短体蛋白、荧光标记的底物短肽、脂质体转染试剂以及模型缓冲液，并混匀；b)加入待测药物；c)避光反应2～4小时；d)测量荧光值变化。因此本发明建立了以RHBDD1为靶点的药物筛选平台，进行基于RBDD1为靶点的抗肿瘤药物的筛选，为临床治疗癌症提供依据。

技术领域

本发明涉及肿瘤药物筛选领域，具体涉及一种以RHBDD1为靶点的抗肿瘤药物筛选模型及方法。

背景技术

肿瘤极大威胁人类健康，抗肿瘤药物研究是当今生命科学中极富挑战性且具有重大意义的领域。随着对肿瘤致病机制的深入研究，细胞内的信号通路变化过程正被逐步阐明，以信号通路为药物筛选靶点发现高效、低毒、特异性强的新型靶向药物已成为当今抗肿瘤药物研究的有效途径之一。针对不同的疾病以及靶点已报道了许多不同的筛选方案并对肿瘤的研究起到一定的作用：对于肝脏微粒体，报道有一种新型的多层微粒体的装置可以进行药物筛选^[1]；以二肽酶DPP4为靶点的抑制剂的高通量筛选的药物已进入临床试验期^[2]；通过电流的刺激对癫痫病人化合物的筛选^[3]；以及通过表型进行的药物筛选方法等^[4]，均是在探索肿瘤药物过程中通过不同肿瘤以及特异性靶点进行的药物筛选。

结直肠癌是世界上常见的恶性肿瘤之一，死亡率居恶性肿瘤的第三位，并有逐年增高的趋势^[5]。Rhomboid家族蛋白质是一类存在于所有物种中高度保守的跨膜丝氨酸蛋白酶，其具有一个保守的Rhomboid结构域^[6]，RHBDD1是本研究组在前期精子发生过程中发现的Rhomboid家族新成员，其在睾丸组织中高表达并与精原细胞的凋亡密切相关^[7,8]。研究表明RHBDD1的失活可以抑制结直肠癌肿瘤细胞的生长，进一步的研究显示RHBDD1与proTGFα相互作用并诱导ADAM非依赖性剪切并促进proTGFα分泌，分泌的proTGFα进一步激活下游EGFR/Raf/MEK/ERK信号通路，并在结肠炎诱导的结肠癌动物模型中证实；RHBDD1也可通过wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路影响结直肠癌的发生发展，暗示RHBDD1在结直肠癌的肿瘤预后中可以作为一个分子标志物，是一个潜在的药物靶点^[9,10,11]。另外，RHBDD1可以通过AKT途径调控CDK2而影响细胞周期，进一步影响乳腺癌的发生发展。这些研究均表明RHBDD1在肿瘤预后中可以作为一个分子标志物，是一个潜在的药物靶点。探索RHBDD1成为结直肠癌新的分子标志物及药物靶标具有重要的意义，进而对癌症的靶向治疗提供重要线索。

因此我们拟构建以RHBDD1为靶点的药物筛选平台，进行基于RBDD1为靶点的抗肿瘤药物的筛选，为临床治疗癌症提供依据。

发明内容

基于上述目的，在第一方面，本发明提供了一种以RHBDD1为靶点的抗肿瘤药物筛选模型，其包括RHBDD1蛋白或其截短体蛋白、荧光标记的底物短肽、脂质体转染试剂以及模型缓冲液。

在一个具体的实施方案中，RHBDD1的截短体蛋白的序列如SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2或SEQ ID NO:3所示。

在一个具体的实施方案中，荧光标记的底物短肽为荧光标记的KEREN短肽，所述KEREN短肽的序列如SEQ ID NO:4所示。

在一个具体的实施方案中，脂质体转染试剂为Invitrogen^TM Lipofectamine^TM3000。

在一个具体的实施方案中，模型缓冲液为含有20mM的Hepes和150mM的NaCl的水溶液。