[发明专利]抗坏血酸诱导卡利比克毕赤酵母防治水果采后病害的方法

说明书

本发明属于水果采后病害生物防治领域，具体涉及抗坏血酸诱导卡利比克毕赤酵母防治水果采后病害的方法；具体步骤为将抗坏血酸加入NYDB培养基中，然后将卡利比克毕赤酵母接种到培养基中进行培养，培养后离心得到菌体，无菌水清洗，然后用无菌水制备成菌悬液；将菌悬液均匀喷洒于水果表面，自然风干后用保鲜膜密封，置于室温存放，实现水果采后病害的控制；本发明利用抗坏血酸诱导的卡利比克毕赤酵母处理水果，可以显著提高该酵母对水果采后病害的生防效力，避免使用化学杀菌剂，不会对人体和环境产生危害，具有显著的经济效益和社会效益。

技术领域

本发明属于水果采后病害生物防治领域，具体涉及一种抗坏血酸诱导卡利比克毕赤酵母(Pichia caribbica)防治水果采后病害的方法。

背景技术

苹果含有丰富的碳水化合物、维生素和微量元素，是人们经常食用的水果之一。中国是世界上最大的苹果生产国和消费国，苹果种植面积和产量均占世界总量的40％以上，在世界苹果产业中占有重要地位。苹果在采后贮运期间，易遭受多种病原菌的侵染产生采后病害，导致果实腐烂变质，经济损失严重。苹果每年因腐烂造成的损失可达30-40％，严重时可高达50％以上。目前已知能引起苹果采后腐烂的致病菌有20多种，其中由扩展青霉(Penicillium expansum)青霉病和灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的灰霉病为苹果两大主要病害，而以扩展青霉引起的腐烂尤为严重，此类病原菌分布广泛，以腐生在有机物上的方式，将所产生的大量分生孢子扩散在空气之中，从而扩散到果实上，引起果实腐烂，损失极大。

在苹果采后病害的防治中，传统的方法主要有物理防治方法和化学防治方法。其中物理方法对苹果采后病害的防治局限性较大，成本较高。而化学防治法主要依靠化学药剂,如邻苯酚钠、仲丁胺以及苯并咪唑类杀菌剂等控制苹果的采后病害。化学防治法效果较好，但杀菌剂的长期和大量使用，严重污染环境，有损于人类健康。过去十多年，公众和科学界对于水果中杀菌剂残留问题的关注日益增加。此外，长期使用化学杀菌剂会使病原菌产生抗药性从而降低防治效果,化学杀菌剂的连续使用,已经造成抗病霉菌的出现。因此，在很多发达国家和地区,一些化学杀菌剂已经开始被限制使用，如，克菌丹(Captan)和苯菌灵(benomyl)等几种杀菌剂已经被美国环保机构所禁用。

随着经济的发展和人们生活水平的不断提高，研究并开发替代化学杀菌剂的安全、无毒、高效的新型水果采后病害防治方法，具有重大的社会意义和广阔的应用前景。当前国际上越来越重视利用微生物拮抗菌控制水果采后病害的研究，并认为这是最有希望取代化学杀菌剂的方向之一。在所有拮抗菌中，拮抗酵母具有效果好、不产毒素、可以和化学杀菌剂共同使用等优点而成为研究的热点。目前，已经有不少科学家分离到诸多拮抗酵母，并且研究其对于苹果采后病害的防治效果，如Debaryomyces hansenii、Pantoeaagglomerans、Candida famata、Cryptococcus albidus等。

然而到目前为止，果蔬采后生物防治的研究虽然已有半个世纪的历史，但实际应用于生产的拮抗菌种类不多，只有Yield Plus，Biosave和Aspire等少数几种产品上市，而我国目前尚没有拮抗菌应用于商业生产，主要是在实际应用过程中，由于环境条件的不确定性，微生物防治的效果往往不如化学杀菌剂。例如，当果蔬受到病原菌侵染等逆境胁迫时，会产生大量的活性氧(ROS)，而对拮抗酵母产生氧化胁迫，降低其生防效力。因此，寻找提高拮抗酵母控制果蔬采后病害效力的方法，是将其应用于实际生产的关键。

抗坏血酸是一种天然存在的具有抗氧化性质的有机化合物，易溶于水，形成轻度酸性的溶液，是常用的食品添加剂之一。同时，抗坏血酸是一种很好的还原剂，在植物细胞中可直接与ROS反应，从而去除游离氧基；抗坏血酸还可以作为抗氧化酶的底物，是赖氨酰基和辅氨酰基羟化酶的辅因子。抗氧化剂和拮抗酵母结合使用，可以提高拮抗酵母对氧化胁迫的耐受性，从而提高其对水果采后病害的生物防治效力；但是，这种目前的生物防治效力较低，所以亟需研究和开发一种新型高效、无毒、安全的苹果防腐保鲜剂。

发明内容