[发明专利]一种用于检测的组合物及检测方法

权利要求书

1.一种组合物，其特征在于，所述组合物至少包括下述1)和2)所述的核酸序列：

1)从5′→3′的连接方向，依次包括：5′端通用引物序列、与荧光探针的核苷酸序列一致的核苷酸序列、与部分和/或全部靶核苷酸序列的碱基互补结合的核苷酸序列；

2)从5′→3′的连接方向，依次包括：与部分和/或全部靶核苷酸序列的碱基互补结合的核苷酸序列、3′端通用引物序列；且核酸序列的5′端的第一个核苷酸经过磷酸化修饰。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括下述1)-8)中的至少一种：

1)荧光探针；

2)连接酶；

3)连接酶反应缓冲液；

4)实时荧光定量PCR反应缓冲液；

5)实时荧光定量PCR反应的引物对，其中，一条引物的核苷酸序列与权利要求1所述5′端通用引物序列的核苷酸序列一致，另一条引物的核苷酸序列与权利要求1所述3′端通用引物序列的核苷酸序列反向互补；

6)dNTP；

7)所述5′端通用引物序列包括序列表中的SEQ ID №：15所示的核苷酸序列；和/或将序列表中SEQ ID №：15所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：15所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；

8)所述3′端通用引物序列序列包括序列表中的SEQ ID №：16所示的核苷酸序列；和/或将序列表中SEQ ID №：16所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：16所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括下述1)-13)中的至少一种：

1)序列表中SEQ ID №：5所示的核苷酸序列；和/或将序列表中SEQ ID №：5所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：5所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；

2)序列表中SEQ ID №：6所示的核苷酸序列，且序列的5′端的第一个核苷酸经过磷酸化修饰；和/或将序列表中SEQ ID №：6所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：6所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列，且序列的5′端的第一个核苷酸经过磷酸化修饰；

3)序列表中SEQ ID №：7所示的核苷酸序列；和/或将序列表中SEQ ID№：7所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：7所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；

4)序列表中SEQ ID №：8所示的核苷酸序列，且序列的5′端的第一个核苷酸经过磷酸化修饰；和/或将序列表中SEQ ID №：8所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：8所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列，且序列的5′端的第一个核苷酸经过磷酸化修饰；

5)序列表中SEQ ID №：9所示的核苷酸序列；和/或将序列表中SEQ ID №：9所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：9所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；

6)序列表中SEQ ID №：10所示的核苷酸序列，且序列的5′端的第一个核苷酸经过磷酸化修饰；和/或将序列表中SEQ ID №：10所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：10所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列，且序列的5′端的第一个核苷酸经过磷酸化修饰；

7)序列表中SEQ ID №：11所示的核苷酸序列；和/或将序列表中SEQ ID №：11所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：11所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；

8)序列表中SEQ ID №：12所示的核苷酸序列，且序列的5′端的第一个核苷酸经过磷酸化修饰；和/或将序列表中SEQ ID №：12所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：12所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列，且序列的5′端的第一个核苷酸经过磷酸化修饰；

9)当所述组合物还包括荧光探针时，所述荧光探针的核苷酸序列为序列表中SEQ ID№：13所示的核苷酸序列；和/或将序列表中SEQ ID №：13所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：13所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；

10)当所述组合物还包括荧光探针时，所述荧光探针的核苷酸序列为序列表中SEQ ID№：14所示的核苷酸序列；和/或将序列表中SEQ ID №：14所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：14所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；

11)当所述组合物还包括荧光探针时，所述荧光探针的5′端标记了荧光基团VIC，3′端标记了荧光淬灭基团BHQ1；

12)当所述组合物还包括荧光探针时，所述荧光探针的5′端标记了荧光基团FAM，3′端标记了荧光淬灭基团BHQ1；

13)当所述组合物还包括实时荧光定量PCR反应的引物对时，所述实时荧光定量PCR反应的一条引物的核苷酸序列为序列表中SEQ ID №：15所示的核苷酸序列；和/或将序列表中SEQ ID №：15所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：15所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列；所述实时荧光定量PCR反应的另一条引物的核苷酸序列为序列表中SEQ ID №：17所示的核苷酸序列；和/或将序列表中SEQ ID №：17所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列表中SEQ ID №：17所示核苷酸序列具有相同功能的核苷酸序列。