[发明专利]一种窿缘桉内生真菌Chaetomium sp次生代谢产物的制备方法及用途

权利要求书

1.一种窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，该方法包含：

(1)将窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.接种到PDA固体培养基平板上活化、继代培养，再将其菌丝接种至PDB液体培养基中，摇培；

(2)将步骤(1)中获得的液体种子接入已灭菌的大米培养基中，后转至28℃恒温发酵培养，获得固体发酵物；

(3)所述的固体发酵物采用甲醇冷浸提取，过滤，滤液浓缩得到粗提物，将所述的粗提物水混悬后用石油醚和乙酸乙酯萃取，分别得到石油醚和乙酸乙酯层粗提物；

(4)通过减压柱层析、葡聚糖凝胶柱层析、半制备型高效液相色谱同时获得化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E和化合物F，分别具有如下式(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)、(Ⅳ)、(Ⅴ)、(Ⅵ)结构：

2.根据权利要求1所述的窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述活化培养5～7d，所述继代培养4～5d。

3.根据权利要求1所述的窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述摇培条件为28℃，150rpm，摇培6～7d。

4.根据权利要求1所述的窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述发酵时间为60d。

5.根据权利要求1所述的窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述减压柱层析依次采用石油醚、体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液作为洗脱液进行洗脱，收集流出液，再依次采用纯石油醚、石油醚和二氯甲烷混合液、纯二氯甲烷、二氯甲烷和甲醇混合液作为洗脱液进行梯度洗脱，收集流出液，经葡聚糖凝胶柱层析、半制备型高效液相色谱获得化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E和化合物F。

6.根据权利要求5所述的窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，所述葡聚糖凝胶柱层析采用Sephadex LH-20。

7.根据权利要求6所述的窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，所述葡聚糖凝胶柱层析采用体积比为1:1的氯仿和甲醇作为洗脱液。

8.根据权利要求7所述的窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，所述化合物A是通过反复重结晶获得的；

所述化合物B通过将减压柱层析梯度洗脱得到的流出液经Sephadex LH-20凝胶柱层析，再经反复重结晶获得；

所述化合物C通过将减压柱层析梯度洗脱得到的流出液经Sephadex LH-20凝胶柱层析，再经半制备型高效液相色谱获得的，该半制备型高效液相色谱的条件为甲醇：水＝75:25，流速：5mL/min，λ＝210nm；

所述化合物D通过将减压柱层析梯度洗脱得到的流出液经Sephadex LH-20凝胶柱层析，再经反复重结晶获得；

所述化合物E是通过将柱层析梯度洗脱得到的流出液经Sephadex LH-20凝胶柱层析，再经半制备型高效液相色谱获得的，该半制备型高效液相色谱的条件为甲醇：水＝65:35，流速：5mL/min，λ＝210nm；

所述化合物F是通过将柱层析梯度洗脱得到的流出液经Sephadex LH-20凝胶柱层析，再经半制备型高效液相色谱获得的，该半制备型高效液相色谱的条件为甲醇：水＝65:35，流速：5mL/min，λ＝210nm。