[发明专利]纤维素外切酶基因和编码的蛋白及其应用有效
| 申请号： | 201811238622.2 | 申请日： | 2018-10-23 |
| 公开（公告）号： | CN109207497B | 公开（公告）日： | 2023-07-07 |
| 发明（设计）人： | 李洪波;胡兴;王晓红;米丹;张赛名 | 申请（专利权）人： | 怀化学院 |
| 主分类号： | C12N15/56 | 分类号： | C12N15/56;C12N9/42;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/14;C12P19/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 重庆嘉品知识产权代理事务所(普通合伙) 50302 | 代理人： | 李阳 |
| 地址： | 418000 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 纤维素 外切 基因 编码 蛋白 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种重组载体，由空载体和插入该空载体的目的基因组成，其特征在于，所述目的基因为SEQ ID No.1所示的基因，所述空载体为pET32载体。
2.一种重组菌，其特征在于：所述重组菌为权利要求1所述的重组载体转化的重组菌。
3.一种纤维素外切酶的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)将权利要求1中所述的基因重组构建到pET32载体中；再转化到大肠杆菌菌株中，得到表达株；
2)将步骤1)表达株在LB液体培养基中培养，并加入0.1～0.5mM的IPTG诱导，发酵完毕，超声破碎，离心取上清，得可溶性重组的纤维素外切酶。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，还包括蛋白纯化步骤：用镍亲合层析柱对步骤2)得到的上清液进行纯化，先用平衡缓冲液平衡层析柱，再将上清液过柱，用含10-50mM咪唑的pH 8.0缓冲液预洗柱子，然后用含100mM～200mM咪唑的pH 8.0缓冲液溶液将融合蛋白洗脱下来即可。
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