[发明专利]气相色谱、质谱联用技术检测线虫中脂肪酸含量的方法

说明书

本发明公开了一种气相色谱、质谱联用技术检测线虫中脂肪酸含量的方法，属于分析化学技术领域。该方法包括以下步骤：(1)配制标准品，用气相色谱、质谱联用方法进行检测，并与质谱数据库进行比对，得到不同保留时间对应的脂肪酸组分，相似度≥95％时确认为该种化合物；(2)配制标准混合液，用内标法，建立气相色谱、质谱联用定性定量方法；(3)预处理线虫样品，获得分析试样；(4)采用步骤(2)建立气相色谱、质谱联用定性定量方法对待测分析试样进行分析检测；(5)计算确定线虫样品中各脂肪酸的含量。该检测方法检测速度快，检测限低，灵敏度高，适用于快速分析线虫中的脂肪酸组成及含量。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，特别涉及一种气相色谱、质谱联用技术检测线虫中脂肪酸含量的方法。

背景技术

线虫其生命周期相对其他实验动物而言非常短暂便于周期性观察；培养条件非常简单，适于实验室培养；体型小，繁殖量大，保证实验样本的需求；而且它是一种有复杂调控的多细胞真核生物，意味它可能与高等动物有相似的细胞分子结构以及控制通路。因为它这些独特的生物学特性，被广泛应用于生命医学学科研究，是一种优秀的模式生物。

线虫体内的多不饱和脂肪酸合成通路结合了植物和动物的过程，与高等动物相比，具有完整的从头合成多不饱和脂肪酸的能力，适合开展游离脂肪酸相关的各类代谢组学研究。通过研究这些物质在线虫体内的作用机理进一步寻找在高等动物上的机制，为以后的深入研究提供准确的实验数据和理论依据。

深入开展游离脂肪酸相关的各类代谢组学研究，需要高效的、稳定的、能同时检测多种脂肪酸的分析测定方法。最常用的分析游离脂肪酸的方法有高效液相色谱、近红外以及气相色谱火焰离子化检测器等分析方法。然而，高效液相色谱方法检测游离脂肪酸，利用柱前衍生耗时长，近红外透射光谱技术分析的测定中相关系数都低于80％，结果相对较差，气相色谱火焰离子化检测器检测游离脂肪酸的响应时间长，灵敏度较低。

发明内容

本发明实施例提供了一种气相色谱、质谱联用技术检测线虫中脂肪酸含量的方法，以解决现有检测分析测定方法耗时长、结果相对较差、响应时间长和灵敏度较低的问题，快速分析线虫中的脂肪酸组成及含量。所述技术方案如下：

本发明实施例提供了一种气相色谱、质谱联用技术检测线虫中脂肪酸含量的方法，该方法包括以下步骤：

(1)配制标准品，用气相色谱、质谱联用方法进行检测，得各脂肪酸的保留时间和GC-MS图谱，并与质谱数据库进行对比，得到不同保留时间对应的脂肪酸组分；

(2)配制标准混合液，用内标法，建立气相色谱、质谱联用定性定量方法,所述定性定量方法是将目标化合物的质谱在质谱库中检索并对比，同时在相同的GC-MS条件下，待测物中目标脂肪酸与分析标准样品得到的保留时间和质谱对比定性，相似度≥95％时确认为该种化合物，定量方法为内标法；

(3)预处理线虫样品，获得分析试样；

(4)采用步骤(2)建立气相色谱、质谱联用定性定量方法对待测分析试样进行分析检测，得分析试样各脂肪酸的保留时间和GC-MS图谱；

(5)计算确定线虫样品中各脂肪酸的含量，所述线虫样品中各脂肪酸的含量按下式计算：

mi:样品中脂肪酸甲酯的含量；As：脂肪酸甲酯标样中内标物的峰面积；Ai：样品中脂肪酸甲酯的峰面积；Asi：样品中内标物的峰面积；Ar：脂肪酸甲酯标样中脂肪酸甲酯的峰面积；mr：脂肪酸甲酯标样中脂肪酸甲酯含量。

在本发明的一种实现方式中，步骤(1)中所述标准品为棕榈酸甲酯16:0，棕榈油酸甲酯16:1，十八硬酸甲酯18:0，油酸甲酯18:1n9，亚麻油酸甲酯18:2n6，α-亚麻酸甲酯18:3n3，十八碳四烯酸甲酯18:4n3，花生四烯酸甲酯20:4n6，类花生酸甲酯20:5n3。