[发明专利]一种麦胚球蛋白分子印迹聚合物的制备方法

说明书

本发明公开了一种麦胚球蛋白分子印迹聚合物的制备方法，步骤如下：将壳聚糖溶于乙酸溶液，加入过饱和的氢氧化钠溶液中，搅拌4‑5h得壳聚糖微球；将上述壳聚糖微球在过饱和氢氧化钠溶液中陈化25‑27h，二次水洗涤，等体积5%的戊二醛溶液混合活化，40‑50min后二次水洗涤，保存备用；将APBA‑磷酸缓冲溶液与人血丙种球蛋白混匀，电磁搅拌3‑4h，使其预聚合，将活化后的壳聚糖微球加入其中，电磁搅拌均匀，静置47‑49h，用二次水洗净，用磷酸缓冲液冲洗至洗脱液检测无蛋白产生，即得印迹聚合物，水封保存。该方法制备的麦胚球蛋白分子印迹聚合物对麦胚球蛋白免疫组分存在特异性吸附且能够有效洗脱。

技术领域

本发明涉及一种麦胚球蛋白分子印迹聚合物的制备方法。

背景技术

麦胚中蛋白质含量高达30%，是麦胚营养物质的精华。研究发现，经盐提的麦胚球蛋白能够增大动物的脾脏等免疫器官，提高动物体内吞噬细胞数量，增加免疫机能。研究发现从麦胚中提取盐溶性球蛋白的免疫组分，与人血丙种球蛋白（Human normalimmunoglobulin，IgG）结构相似，可将免疫组分分离提纯，作为替代人血丙种球蛋白的植物源性免疫调节剂。长期以来，分离纯化植物源性蛋白主要采用常规的色谱法、盐析法及超滤等方法，对于分子质量大，结构复杂，易失活的球蛋白质而言，这些分离手段不足以达到预期效果。目前，研究者一般通过盐提酸沉或离心法对麦胚球蛋白进行粗提取，然后用HSCCC提纯，一般纯度为80%左右，无法得到高纯度的球蛋白单组分。分子印迹技术（Molecularimprinting technology，MIT）作为一种新型的分离手段，以其高度的专一性、选择性而显示出广泛的应用前景，尤其对于结构复杂的生物大分子，如蛋白、核酸等的识别、分离能力具有实际的研究价值。伴随其在生物大分子方面研究的深入，以壳聚糖为载体的表面蛋白质印迹法逐渐获得研究者的青睐。国内外运用壳聚糖为载体，间氨基苯硼酸等为功能单体成功制备出对牛血清蛋白有较高特异性吸附的印迹材料。该方法的应用仅限于牛血清蛋白，对免疫球蛋白的分子印迹研究未见相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种麦胚球蛋白分子印迹聚合物的制备方法。

本发明通过下面技术方案实现：

一种麦胚球蛋白分子印迹聚合物的制备方法，包括如下步骤：将10-20份壳聚糖溶于75-85份体积分数2%的乙酸溶液，迅速加入40-50份过饱和的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌4-5h形成微米级的悬浮浑浊液，即壳聚糖微球；将上述壳聚糖微球在过饱和氢氧化钠溶液中陈化25-27h，二次水洗涤，等体积5%的戊二醛溶液混合活化，40-50min后二次水洗涤，保存备用；将10-20份浓度为100mmol/mL的APBA-磷酸缓冲溶液与0.5-1.5份人血丙种球蛋白混匀，电磁搅拌3-4h，使其预聚合，将20-30份活化后的壳聚糖微球加入其中，电磁搅拌均匀，静置47-49h，用二次水洗净，用pH9.0改良的磷酸缓冲液冲洗至洗脱液检测无蛋白产生，即得印迹聚合物，水封保存；各原料均为重量份。

优选地，所述的制备方法中，磁力搅拌4.5h形成微米级的悬浮浑浊液。

优选地，所述的制备方法中，将上述壳聚糖微球在过饱和氢氧化钠溶液中陈化26h。

优选地，所述的制备方法中，45min后二次水洗涤。

优选地，所述的制备方法中，电磁搅拌3.5h。

优选地，所述的制备方法中，静置48h。

本发明技术效果：

该方法简便、快捷、易操作，制备的麦胚球蛋白分子印迹聚合物对麦胚球蛋白免疫组分存在特异性吸附且能够有效洗脱，为进一步研究开发麦胚球蛋白及医药级球蛋白的纯化提供了新思路。

具体实施方式

下面结合实施例具体介绍本发明的实质性内容。

实施例1