[发明专利]制备带有分子标签的新一代测序接头的方法在审
| 申请号： | 201811245173.4 | 申请日： | 2018-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN109321568A | 公开（公告）日： | 2019-02-12 |
| 发明（设计）人： | 郑贤杰;朱垚;曹振;李剑辉;宋东亮 | 申请（专利权）人： | 翌圣生物科技(上海)有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 200120 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 退火 分子标签 接头序列 新一代 测序 制备 限制性内切酶 双链分子 双链 标签 测序平台 酶切位点 随机碱基 退火程序 信息基础 序列片段 补齐 混匀 碱基 酶切 合成 回收 分析 | ||
1.一种制备带有分子标签的新一代测序接头的方法，其特征在于，包括：
步骤一：合成接头序列，接头序列包含第一序列和第二序列，其中，所述第二序列包括：限制性内切酶的保护碱基和6个随机碱基的双链分子标签，以及限制性内切酶MnlI的酶切位点，第一序列和第二序列中具有互补的序列片段，
步骤二：接头序列退火，混匀第一序列和第二序列，在退火体系中按退火程序退火形成双链，
步骤三：补齐步骤二中所形成的双链的接头，
步骤四：酶切并回收接头。
2.如权利要求1所述的制备带有分子标签的新一代测序接头的方法，其特征在于：
其中，所述第二序列中还具有随机碱基的单链分子标签。
3.如权利要求1所述的制备带有分子标签的新一代测序接头的方法，其特征在于：
其中，所述第二序列中还具有样本标签。
4.如权利要求1所述的制备带有分子标签的新一代测序接头的方法，其特征在于：
步骤三中，采用T4DNA聚合酶延伸补平步骤二中的退火产物。
5.如权利要求1所述的制备带有分子标签的新一代测序接头的方法，其特征在于：
步骤四中，采用限制性内切酶MnlI酶切步骤三中的延伸产物，然后去除50bp以内的残余双链小片段，保留接头。
6.如权利要求1所述的制备带有分子标签的新一代测序接头的方法，其特征在于：
第一序列的序列如下：
5-A*A*TGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGAC-GCTCTTCCGAT*C*T-3。
7.如权利要求1所述的制备带有分子标签的新一代测序接头的方法，其特征在于：
第二序列的序列如下：
5-NNNN-ANNNNNNGAGG-AG*A*TCGGAAGAGC-ACACGTCTGAACTCCAGTCAC-NNNN-NNNNNNNN-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCT*T*G-3
其中，第1至4位为限制性内切酶的保护碱基，碱基数0-10个，
第6位至第11位是六个随机碱基的双链分子标签，
第50位至第53位是四个随机碱基的单链分子标签，
第54位至第61位是6-8个碱基的样本标签，
第5位至第15位是为限制性内切酶MnlI的酶切位点。
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