[发明专利]用于具产毒潜能青霉菌的快速检测引物探针及方法

说明书

本发明公开了一种用于具产毒潜能青霉菌的快速检测引物探针及方法，属于生物技术领域。本发明涉及用于潜藏型产毒青霉菌快速检测的寡核苷酸引物及探针，这是本发明的技术要点。本发明还涉及用于测定潜藏型产毒青霉菌的实时荧光PCR检测方法，所述方法包括使用针对潜藏型产毒青霉菌快速检测的特异性寡核苷酸引物及探针。本发明还涉及针对潜藏型产毒青霉菌的特异性寡核苷酸引物及探针在检测食品中潜藏型产毒青霉菌的应用。使用本发明的PCR检测方法，能够简单、快速、特异且灵敏地检测出食品中是否含有潜藏型产毒青霉菌。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体而言，本发明涉及用于潜藏型产毒青霉菌快速检测的寡核苷酸引物及探针，用于测定潜藏型产毒青霉菌的实时荧光PCR检测方法，以及潜藏型产毒青霉菌的特异性寡核苷酸引物和探针在检测食品中潜藏型产毒青霉菌中的应用。

背景技术

青霉，一般是指青霉属（Penicillium），和曲霉属（AsPergillus）有亲缘关系，有二百几十种，代表种是灰绿青霉，从土壤或空气中很易分离。分枝成帚状的分生孢子从菌丝体伸向空中，各顶端的小梗产生链状的青绿—褐色的分生孢子，根据分生孢子顶端的膨大与否，与曲霉属（AsPergillus）相区别。自从弗莱明（A．Fleming，1929）发现特异青霉（Penicillium notatum）产生抑制细菌生长物质青霉素以来，已对该属菌的很多种进行了研究。特异青霉已被用于制造青霉素，但不具这种机能的种还很多，同时很多青霉甚至产生毒枝菌素。

青霉属菌分布很广，土壤、空气、腐败的有机物质及食品中到处都可以检测到。有些种的青霉是重要的工业用菌，能生产多种有机酸和抗菌素(如常见的青霉素等)，如淡黄青霉（Penicillium Luteum）、产黄青霉（P. chysogenum）等；有些种则是工业生产及视频的破坏者，是引起粮食霉变发热的主要菌，如纯绿青霉（P. viridicatum）、圆弧青霉（P. cyclopium）等；有些青霉会产生毒素，使粮食和食品带毒，还具有浓烈的气味，或分泌色素，造成粮食、食品、饲料变色变味。

青霉属能够产生毒素的霉菌主要有：黄绿青霉（P. citreoviride，又名：异青霉P. toxicarum）、桔青霉（P. citrimum）、圆弧青霉（P. cyclopium）、岛青霉（P. islandicum）、展开青霉（P. patulum，又名：荨麻青霉P. u-rticae）、纯绿青霉（P. viridicatum）、皱褶青霉（P. rugulosum）、产紫青霉（P. purpurogenum）、红青霉（P. vubrum）、扩展青霉（P. expan-sum）等等。由潜藏型产毒青霉菌产生的真菌毒素的化学、生物学和毒理学性质多种多样，其共同的毒性主要表现在致DNA损伤和细胞毒性两个方面。主要的毒性作用包括致癌作用、遗传毒性、致畸作用、肝细胞毒性、中毒性肾损害、生殖紊乱和免疫抑制等。

过去对食品中微生物检测的标准方法主要采用传统的形态学观察和生化反应，存在试验周期较长、操作步骤繁琐、灵敏度低、主观依赖性强等缺陷。此外，由于微生物的种类和生长环境十分复杂，导致有些微生物在培养过程中生长缓慢甚至无法人工培养，这也造成了传统检测方法的局限性。