[发明专利]一种北芪菇中黄芪苷的提取纯化与检验方法

权利要求书

1.一种北芪菇中黄芪苷的提取纯化与检验的方法，其特征在于，以北芪菇为原料，微波超声波萃取仪辅助处理，采用萃取法对黄芪苷进行粗提取，经薄层层析法分离纯化后，利用质谱和红外质谱检测标准品和供试品，测定旋光度和比旋光度，结晶后测定其熔点，其中，以70%的乙醇为提取剂，料液比为1:25，经微波超声波辅助萃取仪辅助处理后获得黄芪苷粗提取液，以氯仿：甲醇：乙酸乙酯：水的体积比13:7:2:2为展开剂，经薄层层析展开分离纯化黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，用色谱甲醇和超纯水作为流动相，用质谱仪测定样品分子质量信息，用红外检测其官能团，并分析其分子结构，利用旋光仪测定旋光度和比旋光度，待溶液蒸发结晶后测定熔点，具体过程如下：

步骤a，以北芪菇为原料，加入70%乙醇，料液比为1:25，振荡浸提，超声波微波萃取仪分三阶段提取，每阶段5min，共15min，超声波频率为50KHz，电机转速900r/min，提取液于4000r/min下离心10min，上清液过滤、浓缩，石油醚去杂后，用饱和正丁醇萃取，合并上层溶液、浓缩至无液体溢出，采用甲醇定容备用；

步骤b，将黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ标准品分别加于色谱甲醇中，超声条件下充分溶解后制得2mg/mL的标准品溶液，置于2～4℃的冰箱中保存备用；

步骤c，将层析板加热活化，用微量进样器吸取黄芪苷粗提液及标准品溶液25μL，依次点供试液20μL，标准品溶液2μL/4μL/6μL，以氯仿：甲醇：乙酸乙酯：水的体积比13:7:2:2静置过夜的下相为北芪菇供试品展开剂，密封后，预饱和20min，放入层析缸中上行展开，待展开前沿距层析板顶端1cm处时，取出放入通风口处，均匀喷10%的硫酸乙醇溶液，加热5分钟后取出，用玻璃板覆盖，四周胶布固定，紫外365nm下检视，薄层色谱成像系统拍照，并标志；

步骤d，用色谱甲醇和超纯水作为流动相，用微量进样器吸取10μL的标准品溶液，进样，对谱图进行分析与保存；将供试品层析板置于TLC-质谱接口上，使激光对准圈出的待测斑点中心处，取样，对谱图进行分析、保存；

步骤e，打开傅里叶红外光谱仪，测试背景，用毛细管吸取标准品溶液于点样中心处，测试样品，对红外谱图进行处理分析，轻刮层析板上的待测斑点置于烧杯中，加入色谱甲醇，过滤取滤液，制得待测液，待测液的红外检测方法与标准品的检测相同；

步骤f，校正旋光仪，分别倒入标准品、待测液，调节模式，测定旋光度和比旋光度，记录数据；

步骤g，将待测液蒸发结晶后测定其熔点。