[发明专利]一种北芪菇中硒代蛋氨酸的提取纯化与检验方法

权利要求书

1.一种测定北芪菇中硒代蛋氨酸含量的方法，其特征在于，以北芪菇为原料，采用酶解法对硒代蛋氨酸进行粗提取，经薄层层析法分离纯化后，利用质谱、红外质谱及紫外检测标准品和供试品并测定含量，测定旋光度和比旋光度，结晶后测定其熔点；具体为：以北芪菇为原料，粉碎筛选，加入5%的硝酸溶液，料液比为1:6，离心操作，沉淀物质加入Tris-Hcl，超声处理，酶解36小时，离心10min，取上清液，超滤离心，抽滤，得到粗提液；以正丁醇：乙酸：水=7:1:2为展开剂，经薄层层析展开分离纯化硒代蛋氨酸，用色谱甲醇和超纯水作为流动相，用质谱仪测定样品分子质量信息，用红外检测其官能团，并分析其分子结构，利用双紫外分光光度计测定含量，利用旋光仪测定旋光度和比旋光度，待溶液蒸发结晶后测定熔点。

2.根据权利要求1所述的一种测定北芪菇中硒代蛋氨酸含量的方法，其特征在于，该具体过程为：

步骤a，以北芪菇为原料，粉碎筛选，加入5%的硝酸溶液，料液比为1:6，离心操作，保留沉淀物质，加入0.5mmol/L的Tris-Hcl，超声处理，每隔12h依次加入胰蛋白酶、蛋白酶K，在37℃下振荡酶解36小时；随后离心10min，取上清液，用截留分子量为3KD的超滤离心，除去蛋白酶及大分子物质，用0.45um的滤膜抽滤，得到粗提液；

步骤b，L-硒代蛋氨酸标准品加色谱纯甲醇溶解，定容，充分溶解后得到1mg/mL的L-硒代蛋氨酸标准品溶液，并将其置于2～4℃的冰箱中保存备用；

步骤c，将层析板加热活化并冷却后，分别吸取粗提液及标准品溶液25μL，在距底边2cm水平线上均匀点样，加样后原点扩散直径不超过3mm，干后再点一次；以正丁醇：乙酸：水=7:1:2为北芪菇供试品展开剂，密封后，预饱和20min，放入层析缸中上行展开，待展开剂前沿距层析板顶端0.8-1.2cm处时，取出晾干，将显色后的层析板放入薄层色谱成像系统，于紫外波长365nm下对层析检视，标志，将展好的层析板用茚三酮溶液喷涂，使之显色，在紫外灯下标记，对比计算Rf值，系统拍照，并标志；

步骤d，用色谱甲醇和超纯水作为流动相，用微量进样器吸取一定量的标准品溶液，进样，对谱图进行分析、保存；将供试品层析板置于TLC-质谱接口上，使激光对准圈出的待测斑点中心处，取样，对谱图进行分析、保存；

步骤e，打开傅里叶红外光谱仪，测试背景，用毛细管吸取标准品溶液于点样中心处，测试样品，对红外谱图进行处理分析，轻刮层析板上的待测斑点置于烧杯中，加入色谱甲醇，过滤、取滤液，制得待测液，观察待测液的红外检测方法与标准品的检测是否相同；

步骤f，将待测液放入双紫外分光光度计中，甲醇为参照，设置扫描范围为200～700nm，光谱扫描，得到紫外扫描图谱、最大吸收峰值；

将L-硒代蛋氨酸标准品配置成0.05-0.25mg/mL的溶液，设置浓度梯度在最大吸收峰值下作出一条标准曲线测定各滤液浓度和吸光值；

步骤g，取待测液分别测定旋光度和比旋光度，记录数据；

步骤h，将待测液蒸发结晶后测定其熔点。