[发明专利]一种利用高效液相色谱仪测定土壤中四霉素残留量的方法

说明书

本发明公开了一种利用高效液相色谱仪测定土壤中四霉素残留量的方法，其在土壤样品中加入甲醇和磷酸缓冲液的混合液，振荡提取后经布氏漏斗减压抽滤，再用甲醇和磷酸缓冲液的混合液洗涤残渣两次，收集全部滤液转入烧杯中，在水浴锅上浓缩至近干后，用磷酸缓冲液定容，过微孔滤膜，得土壤样品待测溶液，再采用高效液相色谱仪紫外检测器测定，外标法定量。本发明的样品制备方法简单，所用有机试剂较少，方法的灵敏度、准确度和精密度符合农药残留分析的技术要求。本发明平均回收率79.74‑81.26％，相对标准偏差3.68‑7.03％，最低检出浓度为0.05mg/kg，具有操作简单，成本低，快速，灵敏度高，定性定量准确的优点。

技术领域

本发明涉及土壤中四霉素残留量检测，具体涉及一种利用高效液相色谱仪测定土壤中四霉素残留量的方法。

背景技术

四霉素(Tetramycin)是一种新型农用抗生素，四霉素为不吸水链霉菌梧州亚种的发酵代谢产物，它包括A1、A2、B和C四个组分，其中A1和A2为大环内酯类的四烯抗生素；B为肽嘧啶核苷酸类抗生素；C为含氮杂环芳香族抗生素。四霉素具有内吸抑菌活性，阻止病菌侵入和扩展作用，是一种高效低毒的防治真菌病害的生物农药，其具有杀菌谱广，对鞭毛菌、子囊菌和半知菌亚门真菌等三大门类二十六种已知病原真菌均有极强的杀灭作用，适用各种作物的多种真菌、细菌病害的防治。目前在生产上主要应用于防治水稻及果树病害，防治效果较好。近几年随着植物细菌性病害的发病逐年加重及真、细菌混发的状况越来越多，四霉素的防治优势更加突出，四霉素防治细菌性病害的活性高，同时对真、细菌病害都有防效，四霉素与其他农药的混配性非常强，因此，四霉素的应用越来越广泛。

土壤作为一个复杂的多介质体系，是农药的一个重要归宿场所。农药不论以何种方式使用，都会直接或间接地进入土壤中，土壤成为农药的蓄积库和耗散地。

随着四霉素的应用，其残留在土壤中可能会威胁到生态平衡，为了研究四霉素在土壤中环境行为，稳定性及残留降解规律，首先必须建立土壤中四霉素残留的检测方法。目前，国内外未见四霉素在任何基质样品中残留量的检测方法报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用高效液相色谱仪测定土壤中四霉素残留量的方法，其具有简单、准确、快速、可靠、成本低和易于掌握普及的特点，为土壤中四霉素残留量分析提供了一种快速可靠的方法。

本发明提供的一种利用高效液相色谱仪测定土壤中四霉素残留量的方法,其包括下列步骤：

步骤一：根据四霉素A1的性质选定高效液相色谱仪检测条件为：检测器采用紫外检测器；色谱柱为长度250mm×4.6mm，粒径5u的Agilent Zorbax-C ₁₈色谱柱,柱温为35℃，流速为0.4mL/min，进样量为20uL，流动相为甲醇：质量浓度1％的甲酸水溶液，甲醇：1％甲酸水溶液的体积比为15：85，波长为292nm,保留时间13.5min；

步骤二：样品预处理

将采集土壤中的杂物去除，过20目筛，混匀后采用四分取样法留样200-300g，装入样品容器中，作为土壤样品；

步骤三：四霉素A1的提取

在步骤二得到的土壤样品中加入甲醇(V)：磷酸缓冲液(V)＝3:7的混合液，在35℃下振荡提取30min，之后经布氏漏斗减压抽滤，再用甲醇(V)：磷酸缓冲液(V)＝3:7的混合液洗涤残渣两次，收集全部滤液转入烧杯中，在80℃水浴锅上浓缩至近干后，用磷酸缓冲液定容至V mL，过0.45μm微孔滤膜，得土壤样品待测溶液；

步骤四：残留量的计算