[发明专利]一种温郁金优良种苗选育方法

权利要求书

1.一种温郁金优良种苗选育方法，其特征在于，包括以下步骤：

建立温郁金种质资源圃：搜集、引进温郁金种质材料，集中分区域种植于种质资源圃，插牌标记；

施加PGRP菌株：种植期间，每隔20-40天，施加温郁金特异性PGRP菌株混合物，所述温郁金特异性PGRP菌株是从当地温郁金种植地区所种植温郁金根系土壤中收集、筛选、培养、繁育得到；

种质特性评比：在当年11月1~5日，在温郁金种质资源圃中，针对不同种质个体和小群体进行形态特性评比，选择株高在70～120cm、叶片长×宽在51～60cm×16～22cm的植株，计算百分比；

采收：在当年11月4-6日，将全株挖起，抖掉泥土，摘下块根，保留根须，计算霉败率、除去霉败品后的单株产量、平均单株产量、标准偏差；

复种：在第二年的3月下旬～4月中旬温度达到13℃以上时下种，采用穴栽，栽种前取出上年贮存的种茎，除去须根，每穴放入种茎2～4个，芽眼向上栽种，均匀摆放，放种时种茎与土壤密接，栽后覆盖细土，厚3～5厘米；

优良种苗选择：重复步骤（2）-（4），进行评比，选出连续两年株高在70～120cm、叶片长×宽在51～60cm×16～22cm的植株，再综合评估霉败率、除去霉败品后的单株产量、平均单株产量、标准偏差，得到优良种苗。

2.根据权利要求1所述的温郁金优良种苗选育方法，其特征在于：步骤（2）中，温郁金特异性PGRP菌株混合物通过以下方法得到：

采集当地温郁金种植地区温郁金根系土壤，置于液体培养基中，避光摇床培养，隔数天转接培养液至新鲜的液体培养基富集培养；

将富集培养液与温郁金凝集素粗品或温郁金凝集素纯品混合，摇床反应1-2h，在0-8℃、1000-2500r/min下离心5-10min，得到沉淀物；

在沉淀物中加入含有200mM 乳糖的缓冲溶液，摇床反应1-2h，在0-8℃、3000-4000r/min下离心15-30min，沉淀为温郁金特异性PGRP菌株混合物。

3.根据权利要求2所述的温郁金优良种苗选育方法，其特征在于：所述的温郁金凝集素粗品通过以下方法得到：

取新鲜的温郁金，切片，粉碎打浆，得到浆状原料，在0-8℃、8000 -10000r/min下离心20-45 min，弃上清液，得第一次沉淀物；

在pH为5.5～6.5的缓冲溶液中加入1～3%的复合酶溶液，所述复合酶溶液为纤维素酶:果胶酶=2～3:1，与第一次沉淀物以体积比5～7:1混合，混合后在常温下，低速搅拌4-6h，然后在0-8℃、2000 r/min下离心10-15 min，取上清液，然后在0-8℃、8000 -10000 r/min下离心20-45 min，弃上清液，得第二次沉淀物；

在第二次沉淀物中按1:1-2的体积比加入预冷石油醚，在0-8℃下，低速搅拌10-30min，抽滤，按1:0.5-1的体积比加入预冷丙酮，静置1-2min，抽滤，晾干，得第三次沉淀物；

在第三次沉淀物中按1:8-10的体积比加入PH为5.5-6.5的缓冲液，在0-8℃下，低速搅拌2-4h，在0-8℃、8000-10000 r/min下离心20-45 min，弃沉淀物，按1:0.1-0.3的体积比在上清液中加入饱和硫酸铵，在0-8℃下，低速搅拌1-2min，在0-8℃、2000-3000 r/min下离心2-4 min，弃沉淀物，按1：2.5-2.9的体积比在上清液中加入饱和硫酸铵，在0-8℃下，低速搅拌3-5min，在0-8℃、8000 -10000 r/min下离心25-35min，得到第四次沉淀物；

将第四次沉淀物溶于水中，置于透析袋中进行透析至透析液中无硫酸根，冷冻干燥得到温郁金凝集素粗品；

所得到的温郁金凝集素粗品与富集培养液以浓度0.1-0.2g/L混合。

4.根据权利要求1所述的温郁金优良种苗选育方法，其特征在于：步骤（5）中，复种所用种茎为上年度株高在70～120cm、叶片长×宽在51～60cm×16～22cm之间的植株上采集的长度70～80mm一级二头、三头的根茎。