[发明专利]利用微生物发酵产高效抗氧化活性物质的方法

说明书

利用微生物发酵产高效抗氧化活性物质的方法，涉及一种抗氧化活性物质的生产方法。是要解决现有的微生物发酵产活性物质成分单一的问题。方法：一、将GRP13菌株接种于马铃薯固体培养基平板上，培养得到活化的GRP13菌株；二、将活化后的GRP13菌株接种于液体马铃薯培养基中，培养得到种子培养液；三、取种子液接种至马铃薯液体培养基中发酵，获得GRP13菌株发酵样品，真空抽滤，减压浓缩，即为抗氧化活性物质。本发明方法能够产生抗氧化活性物质，经检测为多种甘草活性成分，且纯度较高，从而起到节省药用植物甘草资源的目的。本发明用于微生物发酵产甘草活性物质。

技术领域

本发明涉及一种抗氧化活性物质的生产方法。

背景技术

甘草作为一味传统中医药材，主要分布于宁夏、内蒙古、新疆和黑龙江等北部地区，因其具有多种功效，传统配方中又有“十方九草”的说法，故野生甘草被过度采挖，濒临灭绝，现已被列入《野生药材资源保护条例》的国家二级保护植物。

经大量研究发现，现有200种物质已经从甘草物种中分离出来，这些物质也会随着甘草种类、地理位置和加工方式的不同而发生明显的改变，其主要成分为：三萜皂苷类、黄酮类物质；其中三萜皂苷类物质主要包括甘草酸、甘草次酸、异甘草次酸，甘草甜素、内脂等；黄酮类物质包含多个种类，如黄烷酮、二氢黄酮、查尔酮和异黄酮等种类，主要代表成分为甘草素(Liquiritigenin)，异甘草素(Isoliquiritigenin)，甘草苷(Liquiritin)，异甘草苷(Isoliquiritin)，新甘草苷(Neoliquiritin)等。

目前能够发酵产甘草活性物质的微生物资源较少，而且产生的活性物质均为单一成分，难以代替野生甘草植物。

发明内容

本发明是要解决现有的微生物发酵产活性物质成分单一的问题，提供一种利用微生物发酵产高效抗氧化活性物质的方法。

本发明利用微生物发酵产抗氧化活性物质的方法，包括以下步骤：

一、甘草内生真菌GRP13菌株的活化：

将GRP13菌株接种于马铃薯固体培养基平板上，放置于27～29℃恒温箱中，培养3～4d，得到活化的GRP13菌株；

二、甘草内生真菌GRP13种子液的制备：

将活化后的GRP13菌株接种于液体马铃薯培养基中，于27～29℃，130～150r/min摇床培养3～4d，制成1×10⁷～1×10⁸CFU/mL种子培养液；

三、甘草内生真菌GRP13发酵液供试品的制备：

取种子液接种至马铃薯液体培养基中，27～29℃、130～150r/min摇床发酵14～16d，获得GRP13菌株发酵样品，将GRP13菌株发酵样品真空抽滤，得GRP13菌株发酵液，将所得GRP13菌株发酵液至于50～55℃减压浓缩至相对密度为1.1～1.2，即为抗氧化活性物质。

所述GRP13菌株为烟曲霉(Aspergillus fumigatus)GRP13，已在中文专利CN104774774B中公开，保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是武汉市武汉大学，保藏日期为2015年4月1日，保藏编号为CCTCC NO：M 2015186。

进一步的，步骤一中马铃薯固体培养基的配方为去皮马铃薯块200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。

进一步的，步骤二中液体马铃薯培养基的配方为去皮马铃薯块200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL。

马铃薯培养基的配置方法为：取200g马铃薯块煎汁30，过滤，加入20g葡萄糖，定容至1L，pH值7.0，121℃灭菌30min，冷却，备用。