[发明专利]单链环状DNA病毒GyV3的亚单位疫苗及其制备

说明书

本发明提供了单链环状DNA病毒Gyrovirus 3(GyV3)的亚单位疫苗及其制备方法，该疫苗为两种，一种为VP1_90‑463蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；一种为VP1_90‑463‑linker‑VP2融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；上述两种亚单位疫苗为基因工程亚单位疫苗，无副作用可以引起较高的抗体滴度及对GyV3病毒有良好抵抗效果，可以广泛的应用于GyV3引起的传染性腺胃炎的免疫预防工作中。

技术领域

本发明涉及分子免疫学和病毒学领域，具体涉及了单链环状DNA病毒GyV3的亚单位疫苗及其制备。

背景技术

近年来传染性腺胃炎给养禽业带来了巨大的危害，其可发生于不同品种的蛋鸡和肉鸡，病流行较广，发病地区发病率一般为7％～28％，死亡率一般为30％～50％。临床病鸡以极度消瘦、腺胃肿大，粪便过料为主要症状，但其病原众说纷纭，一直未有定论，在这种情况下，无法采用更好的免疫预防手段来防控传染性腺胃炎，给家禽养殖业带来了极大的危害，也成为本领域技术人员急需要解决的问题之一。

发明内容

针对现有存在的上述问题，本发明提供了一种单链环状DNA病毒GyV3的亚单位疫苗及其制备，该疫苗为两种，一种为VP1_90-463蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；一种为VP1_90-463-linker-VP2融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；上述两种亚单位疫苗为基因工程亚单位疫苗，无副作用可以引起较高的抗体滴度及对GyV3病毒有良好免疫效果，可以广泛的应用于传染性腺胃炎的免疫预防工作中。

本发明是基于下述理论基础进行的深入研究获得的：

环状病毒GyV3(GenBank登录号MG366592)，首先公开于下述现有技术中Journalof General Virology(2012),93,1356–1361，根据其记载，该病毒是在一例儿童腹泻病例中发现的，之后没有进行相关研究，因此除上述公开文献外，其研究一直处于空白状态，本发明的发明人首次在2017年获得了患有鸡传染性腺胃炎的病鸡，通过患腺胃炎病鸡腺胃的高通量测序，在上述患有传染性腺胃炎鸡中鉴定出了上述的GyV3病毒(GenBank登录号MG366592)。目前，GyV3在鸡群中第二个被鉴定的单链环状DNA病毒，第一个单链环状DNA病毒是鸡传染性贫血病毒。发明人通过回归动物实验，发现GyV3病毒可以引起鸡免疫抑制、贫血以及腺胃肿大等传染性腺胃炎的典型症状，可以确定两者之间的关系，因此发明人决定制备GyV3病毒亚单位疫苗进行免疫原性研究，对动物进行保护；进而获得了本发明的技术方案；

根据现有技术可知，GyV3病毒属于单股环状DNA病毒，由三个开放阅读框构成，分别为VP1(1392bp),VP2(720bp)和VP3(378bp)，本发明选取GyV3的囊膜蛋白VP1为目标蛋白，为实现其在大肠杆菌中大量表达，将N’端稀有密码子去除，选取VP1蛋白第90位至463位氨基酸进行表达以制备亚单位疫苗；

除此之外，发明人还发现，该病毒的VP1蛋白和VP2蛋白可以相互作用，无结构的VP2蛋白在病毒粒子组装中扮演者骨架蛋白的角色，对结构蛋白VP1的抗原表位产生作用。VP1和VP2共同表达可以起到更好的保护作用，因此除了上述单独选用VP1蛋白第90位至463位氨基酸进行表达以制备亚单位疫苗之外，还提供了选择VP1和VP2作为制备疫苗的目标蛋白的技术方案，发明人将其进行了分别的表述如下：

1.选取VP1蛋白第90位至463位氨基酸进行表达以制备亚单位疫苗：