[发明专利]稳定的多抗原结合抗体

说明书

本发明提供了与多个抗原结合的抗体，所述抗体具有至少两个抗体轻链可变结构域和两个抗体重链可变结构域，其中每个轻链可变结构域与重链可变结构域连接以形成VH/VL构建体，并且其中至少一个所述VH结构域包含AHo位置12、AHo位置103和/或AHo位置144上的具体氨基酸，并且至少一个所述VL结构域包含AHo位置47和/或AHo位置50上的具体氨基酸。还公开了用于表达本发明的重组抗体的核酸分子、载体和宿主细胞、用于分离它们的方法以及所述抗体在医学中的用途。

相关申请的交叉引用

本申请根据35U.S.C.§119要求2011年10月20日提交的美国临时专利申请号61/549,482的优先权，所述临时专利申请的全部内容以引用的方式并入本文。

发明领域

本发明涉及一种稳定的多抗原结合抗体，其具有至少两个抗体轻链可变结构域、两个抗体重链可变结构域，并且缺乏恒定结构域，其中每个轻链可变结构域与重链可变结构域连接以形成VH/VL构建体，并且其中至少一个VH结构域包含AHo位置12、AHo位置103和/或AHo位置144上的具体氨基酸，并且至少一个VL结构域包含AHo位置47和/或AHo位置50上的具体氨基酸。本发明进一步涉及产生此类抗体的方法和包含此类抗体的药物组合物。

发明背景

能够与多于一个抗原结合的抗体分子是希望作为用于治疗涉及多种蛋白质的疾病的潜在治疗剂。例如，经常希望以相同的信号传导途径靶向两种蛋白质或通过以每个途径靶向蛋白质来调整两个不同途径的活性。此类抗体的实例包括多特异性抗体(例如，结合两个不同靶分子的双特异性抗体)和多价抗体(例如，结合一个靶分子的两个不同结合位点的二价抗体)。在治疗性抗体的领域中已开发了若干方法使两种治疗性抗体组合到单个分子中，以便利用加性效应或协同效应同时维持稳定性和其它希望的性质。此类方法包括重组形式如串联单链可变片段(TdscFv)(Hagemeyer等，2009，Thromb Haemost101：1012-1019；Robinson等，2008，Br J Cancer99：1415-1425)、双抗体(diabody)(Hudson等，1999，JImmunol Methods231：177-189)、串联双抗体(Kipriyanov，2009，Methods Mol Biol562：177-193)、二合一抗体(Bostrom等，2009，Science323：1610-1614)以及双重可变结构域抗体(Wu等，2007，Nat Biotechnol25：1290-1297)。

其中两组分治疗方法是有吸引力的疾病的一个实例为脉络膜新血管形成。脉络膜新血管形成的血管组分包括血管内皮细胞、内皮细胞前体以及周细胞。血管外组分(所述血管外组分在组织病理学上看起来是血管生成刺激物的来源并且常常是体积最大的组分)包括炎症性的、神经胶质的和视网膜的色素上皮细胞以及成纤维细胞。组织损伤可以由任一组分引起。每个组分可以通过多种单一疗法来分别靶向。然而，对抗血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤坏死因子(TNF)的双特异性抗体代表同时攻击两个组分的机会。

与多特异性抗体和多价抗体相关的常见问题是稳定性差，以及关于生产收率、纯度和亲和性的问题。已开发了解决这些问题的各种方法，包括合理设计和定向进化(Mabry和Snavely，2010，IDrugs13：543-549)。然而，此类方法费时并且尚未提供普遍适用的结果。

因此，本领域存在对多特异性和多价抗体形式的需要，所述多特异性和多价抗体形式是稳定的和可溶的并且缺乏传统多特异性抗体形式和多价抗体形式的缺陷。

发明概述