[发明专利]一种犬细小病毒抗体化学发光定量检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种犬细小病毒抗体化学发光定量检测试剂盒，包括包被犬细小病毒的毛细管、ALP标记的蛋白G工作液、清洗液、发光底物、犬细小病毒抗体质控品和犬细小病毒抗体标准品。本发明灵敏度高、特异性强、线性范围宽、上样量小、需要的血清样本量小、操作方法简便。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，尤其涉及一种犬细小病毒抗体的检测试剂盒。

背景技术

犬细小病毒病又名犬出血性肠炎，是一种高度接触性传染病，临床以剧烈呕吐、出血性肠炎或非化脓性心肌炎和白细胞显著减少为主要特征，有两种临床表现型，出血性肠炎型和心肌炎型。以幼犬最易感，发病率为50～100％，病死率在10～50％，是危害宠物犬、警犬以及其他犬科动物最重要病原之一。另外，犬细小病毒还可感染狐狸、狼、貉等犬科动物，对我国皮毛动物等特种经济动物养殖业造成巨大的经济损失。我国2008年修订的《一、二、三类动物疫病病种名录》将犬细小病毒病列为三类动物疫病。

细小病毒感染一旦发病治愈率特别低，没有特效药，免疫接种是犬细小病毒病防控的有效途径。目前二联、六联等疫苗的广泛应用，犬细小病毒疾病得到了极大控制。由于犬只机体状况、疫苗质量或疫苗注射时间等原因，可能导致犬只在注射完疫苗后不能得到有效的免疫。注射疫苗后动物体内抗体水平是评价免疫效果的主要指标，同时也是科学制定免疫程序的重要依据，因此动物免疫后对抗体水平的监测尤为重要。

目前，犬细小病毒抗体常用的检测方法有两种。一种是酶联免疫吸附测定(ELISA)，另一种是胶体金免疫层析法。

酶联免疫测定是目前主要检测手段，技术较成熟、应用较广且成本较低，但其存在灵敏度低，线性范围窄、不易实现全自动化等方法学限制因素。另外，酶联免疫测定还存在包被蛋白量相对较多，样本、试剂和底物等用量较多的缺点。

胶体金免疫层析法主要应用于定性或半定量检测，存在灵敏度低、定量难等问题。

发明内容

为解决上述现有技术的不足，本发明提供了一种犬细小病毒抗体化学发光定量检测试剂盒，该试剂盒灵敏度高、特异性强、线性范围宽、上样量小、需要的血清样本量小、操作方法简便。

为了达到上述技术目的，本发明所采用的技术方案是：

一种犬细小病毒抗体化学发光定量检测试剂盒，其特征在于：包括包被犬细小病毒的毛细管、ALP标记的蛋白G工作液、清洗液、发光底物、犬细小病毒抗体质控品和犬细小病毒抗体标准品。

所述包被犬细小病毒的毛细管是通过采用戊二醛法或碳化二亚胺法将犬细小病毒包被到氨基化的毛细管上得到。

所述戊二醛法具体为：

活化缓冲液：用0.1M磷酸盐缓冲液配制2.5%的戊二醛溶液。

活化毛细管：用活化缓冲液浸泡已氨化的毛细管，在温度为22～28℃条件下，活化1～3h后用0.1M磷酸盐缓冲液清洗三次后吹干；

包被：将犬细小病毒抗原用0.1M磷酸盐缓冲液稀释到5μg/mL，制成包被液；在温度为22～28℃条件下，将活化的毛细管浸泡在包被液中进行包被，1～3h后用0.1M磷酸盐缓冲液清洗三次后吹干；

封闭：对包被的毛细管用封闭液进行封闭处理，封闭温度为22～28℃，封闭时间为1～3h，封闭完成后，用清洗液清洗3次后吹干在温度为2～8℃条件下保存；其中；所述封闭液是由50mM 、pH =7.0～7.5 的Tris-HCl配制的含2%（质量百分比）的BSA和0.2M 甘氨酸的缓冲液；

所述碳化二亚胺法具体为：

制取包被液：用50mM PH6.0 的MES缓冲液溶解犬细小病毒与EDC，配制出包被液；所述包被液中，犬细小病毒的浓度为5ug/ml，所述EDC的浓度为50ug/ml