[发明专利]一种竹叶内部解剖结构三维立体图的获得方法

权利要求书

1. 一种竹叶内部解剖结构三维立体图的获得方法，其特征在于，随机采集完全舒展的健康功能竹叶，并用锋利刀片迅速切下竹叶中部，大小为0.5cm×0.5cm；竹叶采集后，先立即在70% FAA液中固定；再进行复水处理：分别将叶片取出放置50%酒精-30%酒精-15%酒精-纯水各1 h；然后采用氢氟酸进行去硅预处理，再进行脱水和常规石蜡制片法制片，获得竹叶的纵切面和横切面切片；番红固绿双重染色法染色，中性树胶封片，观察获得竹叶的纵切面和横切面结构图；FAA固定后的竹叶样品，通过酒精梯度脱水，二甲苯透明过夜，换至70%酒精后直接镜检获得平切面结构图；再用拼图软件将纵切面、横切面和平切面结构图拼构出竹叶三维示意图；其中，去硅预处理为将竹叶置于25%氢氟酸中处理36-48 h；将采集的竹叶立即放入固定液70% FAA中固定至少48 h，取出固定后的竹叶进行梯度复水处理；去硅处理结束后，将竹叶取出，用纯水清洗后，进行梯度酒精脱水：依次将竹叶置于15%酒精-30%酒精-50%酒精-70%酒精各1h；竹叶三面结构获得后，用Photoshop CS6软件拼构竹叶三维示意图。

2.根据权利要求1所述的竹叶内部解剖结构三维立体图的获得方法，其特征在于，常规石蜡制片法为：将固定好的竹叶经70%、80%、90%乙醇逐级脱水，每级停留2 h，后再用无水乙醇脱水2次，每次停留1 h；脱水处理后的竹叶从无水乙醇中分别转入1:1、1:3二甲苯-无水乙醇混合液中，各级停留1.5 h，后转入纯二甲苯中2次，每次停留1 h，进行透明处理；将石蜡与二甲苯按1:2比例配成混合液，将透明好的材料放入上述混合液中于38℃烘箱过夜，后更换1:1石蜡-二甲苯混合液于58 ℃烘箱2 h再转入纯蜡中2次，每次停留1 h；最后进行包埋；然后使用自动切片机切取厚度为8 μm的切片。

3.根据权利要求1所述的竹叶内部解剖结构三维立体图的获得方法，其特征在于，切片做好后，Leica DM2500光学显微镜下观察。