[发明专利]一种针对Her2+肿瘤的多功能融合蛋白及其应用

说明书

本发明涉及一种针对Her2+肿瘤细胞的多功能融合蛋白，其中包括特异性识别肿瘤抗原Her2的单链抗体可变区(scFv)、屏蔽肿瘤免疫抑制蛋白CD47信号的SIRPα胞外功能区、结合Fc受体的高亲和力IgG1Fc、以及用于连接各功能区的非功能性氨基酸片段；本发明还涉及上述融合蛋白的制备和应用。本发明所述的重组融合蛋白既能识别Her2阳性的肿瘤细胞，又能屏蔽CD47免疫抑制信号通路，同时高亲和力的Fc部分可以增强免疫细胞对肿瘤的免疫反应，具有很好的临床前景和广泛的应用范围。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种针对Her2+肿瘤的融合蛋白及其在肿瘤治疗中的应用。

背景技术

肿瘤的发生是由于机体细胞分裂过程中产生基因突变而导致细胞生长失去控制的结果。乳腺癌是女性发病率最高的癌症(Int J Cancer.2010，127:2893–2917)，其中三分之一患者具有高表达Her2(ERBB2)表征。Her2是酪胺酸激酶家族成员之一，其高表达可以导致细胞过度生长而形成肿瘤。针对Her2的抗体Trastuzumab是第一个批准用于治疗乳腺癌的抗体药物，能够明显增加Her2阳性患者的生存率，临床应用的有效率为11-26％。但是，即使初始阶段有效，大部分患者也会在一年内复发(Oncogene.2007，26:3637–3643)。造成对Trastuzumab耐药性的原因很多，其中肿瘤细胞通过高表达CD47来逃避免疫杀伤是原因之一。

CD47是一种多功能蛋白，与其配体共同作用可以产生一系列功能，例如促进细胞生长、迁移及防止自体免疫(Nat Med 2015，21：1122–3)，与表达在巨噬细胞和抗原递呈细胞表面信号调节蛋白(signal regulatory protein-α，SIRPα)的结合可以诱导免疫抑制信号，防止巨噬细胞对CD47阳性细胞的内吞(Trends Cell Biol 2001，11：130–135；Science2000，288：2051–2054)。外周血中红细胞，血小板，淋巴细胞及干细胞广泛表达CD47，这也是以上细胞避免被巨噬细胞吞噬的主要机制(J Exp Med 2001，193：855–862；Leuk Lymphoma2004，45：1319–1327；Cell 2009，138：271–285)。肿瘤产生免疫抑制的一种方式是通过CD47与其配体信号通路激活来抑制免疫系统对肿瘤的反应。越来越多的证据表明，CD47普遍高表达在各种实体瘤细胞表面(PNAS 2012，109：6662–6667)，而高表达CD47的实体瘤可以逃避巨噬细胞的识别和内吞，是肿瘤逃避免疫监控，进而生长和扩散的主要机理之一(TrendsImmunol 2010，31：212–219)。CD47信号通路的激活也是有些抗体药物临床作用不理想的原因之一(PNAS 2011，108：18342–18347)。同时，肿瘤细胞CD47的表达量与患者生存时间成明显负相关性(Trends Cell Biol 2001，11：130–135)。现有证据表明，利用抗体阻断CD47与SIRPα的相互作用可以增加巨噬细胞对肿瘤细胞的内吞，抑制肿瘤的扩散与转移(J ClinInvest 2016，126：2610–20；PLoS ONE 10(9)：e0137345)。但是，由于抗体的亲和力较高，利用抗体的免疫抑制作用会造成对其他表达CD47细胞的清除，例如导致红细胞缺少，造成极度贫血现象(eLife 2017；6：e18173)。由于SIRPα-CD47亲和力较弱和巨量表达CD47的细胞的存在，所以单纯利用SIRPα进行屏蔽CD47的效果也不理想。

截止目前，单一功能针对Her2阳性肿瘤细胞的药物存在疗效低等缺点，且临床上还没有一种利用高亲和力片段增加靶细胞周围蛋白量而达到阻断低亲和力抑制信号通路的蛋白药物。

发明内容