[发明专利]一种含铜纳米棒复合物快速检测试剂盒的制备方法及应用

权利要求书

1.一种含铜纳米棒复合物快速检测试剂盒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)首先制备好金纳米棒溶液，向金纳米棒溶液中加入硫代硫酸钠(Na₂S₂O₃)溶液，置于50℃热水中反应5分钟后，再加入硝酸铜(Cu(NO₃)₂)溶液，即得到具有过氧化物模拟酶性质的含铜纳米棒复合物；

(2)将步骤(1)制备的含铜纳米棒复合物在离心机上以8000rpm离心10分钟，去除上清液，再用二次蒸馏水进行分散后备用；

(3)检测葡萄糖的含量：在不同的离心管中各加入不同浓度的葡萄糖溶液，再分别加入葡萄糖氧化酶反应，然后分别加入步骤(2)制备的含铜纳米棒复合物以及显色剂(TMB)，最后用0.1mol/L HCl调节pH，待显色稳定后，在紫外分光光度计上测其吸收光谱；依据葡萄糖在葡萄糖氧化酶作用下能够分解产生双氧水，利用含铜纳米棒复合物的过氧化物模拟酶性质进一步催化分解双氧水产生羟基自由基，从而使显色剂(TMB)显色；根据葡萄糖浓度的不同，产生双氧水的量不一样，含铜纳米棒复合物催化分解双氧水产生的羟基自由基也不一样，进而使显色呈现一定梯度，再根据显色剂在波长652nm处的吸光度值与葡萄糖浓度的关系可获得线性关系良好的标准曲线，根据其标准曲线能计算得到待测样品中葡萄糖的含量；

(4)往步骤(2)制备的含铜纳米棒复合物中加入胰岛素DNA适配体(INS-aptamer)；依据含铜纳米棒复合物上的金与巯基可形成金硫化学键，将含铜纳米棒复合物溶液通过金硫化学键与带巯基的胰岛素DNA适配体(INS-aptamer)相连接；

(5)依据胰岛素DNA适配体(INS-aptamer)与胰岛素的特异性结合，在不同的离心管中各加入步骤(4)所得已连接INS-aptamer的含铜纳米棒复合物，再分别加入不同浓度的胰岛素，反应20分钟；

(6)向步骤(5)所得溶液体系中加入双氧水溶液和TMB显色，再根据显色剂在波长652nm处的吸光度值与胰岛素浓度的关系可获得线性关系良好的标准曲线，根据其标准曲线能计算得到待测样品中胰岛素的含量。

2.根据权利要求1所述含铜纳米棒复合物快速检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述制备金纳米棒溶液是采用晶种法进行制备。

3.根据权利要求1所述含铜纳米棒复合物快速检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述在制备含铜纳米棒复合物过程中，加入硫代硫酸钠溶液后纳米棒的纵向等离子体共振吸收峰会发生红移，继续加入硝酸铜溶液后，其纵向等离子体共振吸收峰会发生蓝移。

4.根据权利要求1所述含铜纳米棒复合物快速检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，在葡萄糖溶液中加入葡萄糖氧化酶反应，其反应温度为37℃，反应时间为30分钟。

5.根据权利要求1所述含铜纳米棒复合物快速检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，加入显色剂后将溶液体系环境pH用0.1mol/L HCl调节至6。

6.根据权利要求1所述含铜纳米棒复合物快速检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，对葡萄糖浓度的检测限值为2.5×10^-6mol/L。

7.根据权利要求1所述含铜纳米棒复合物快速检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，含铜纳米棒复合物中加入INS-aptamer在4℃作用12小时后，再以4000rpm离心10分钟，去除上清液，再用二次蒸馏水进行分散。

8.根据权利要求1所述含铜纳米棒复合物快速检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤(6)中，对胰岛素浓度的检测限值为0.014μU/mL。

9.一种如权利要求1所述含铜纳米棒复合物快速检测试剂盒的应用，其特征在于：由于1型糖尿病和2型糖尿病中的胰岛素含量及葡萄糖和胰岛素之间的浓度比不同，利用葡萄糖分解产生双氧水和胰岛素对含铜纳米棒复合物的覆盖，调节含铜纳米棒复合物的用量和pH，采用TMB显色来区分1型糖尿病和2型糖尿病。