[发明专利]一种异源重组毕赤酵母工程菌GS115-pPIC9K-LacGWLF及其应用有效
| 申请号： | 201811266756.5 | 申请日： | 2018-10-29 |
| 公开（公告）号： | CN109294936B | 公开（公告）日： | 2021-05-11 |
| 发明（设计）人： | 管政兵;夏静;廖祥儒 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N9/02;C12N15/53;C02F3/34;C12R1/84 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 何金锦 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 酵母 工程 gs115 ppic9k lacgwlf 及其 应用 | ||
1.一种异源重组毕赤酵母工程菌GS115-pPIC9K-LacGWLF在制备GWLF漆酶中的应用，其特征在于，所述异源重组毕赤酵母工程菌携带来源于短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)CotA漆酶突变体GWLF的目的基因；将GWLF漆酶基因重组进毕赤酵母GS115基因组得到所述工程菌；所述GWLF漆酶基因编码 的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述GWLF漆酶基因的核酸序列如SEQ ID No.1所示，诱导温度为26℃，诱导时间为144h，甲醇浓度为1％，pH为7，铜离子浓度为0.25mM，以浓度为0.5％的山梨醇为非抑制性碳源。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述重组毕赤酵母工程菌GS115-pPIC9K-LacGWLF的制备方法具体包括如下步骤：
(1)将GWLF漆酶基因连入毕赤酵母表达载体pPIC9K，得到重组表达载体pPIC9K-LacGWLF；
(2)将重组表达载体pPIC9K-LacGWLF经SacI单酶切线性化之并纯化后电转化至GS115菌株，得到异源重组酵母工程菌GS115-pPIC9K-LacGWLF，并在含100μg/Lzeocin的YPD平板进行阳性转化子筛选；以YPD平板上的转化子为模板，以5′AOX1和3′AOX1为引物进行PCR鉴定；PCR鉴定正确的转化子接种到含有0.3mMABTS和0.25mMCuSO4的BMMY平板上进行活性鉴定，菌落周围出现蓝绿色反应圈的转化子为重组毕赤酵母工程菌GS115-pPIC9K-LacGWLF。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述GWLF漆酶用于偶氮染料伊文斯蓝的脱色。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述GWLF漆酶用于偶氮染料伊文斯蓝的降毒。
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