[发明专利]一种乌桕组培不定芽瓶外生根育苗的方法

说明书

本发明公开了一种乌桕组培不定芽瓶外生根育苗的方法，包括以下步骤：1)取乌桕幼嫩叶片为外植体，经表面消毒后，切块；2)将叶片切块进行不定芽的诱导培养；3)将不定芽进行不定芽的继代伸长培养；4)待不定芽长至2‑4cm，并伴有2‑6片叶子时，切下不定芽，清洗后进行瓶外不定根诱导预处理；5)将经不定根诱导预处理后的不定芽进行不定根的诱导和成苗培养，获得乌桕再生植株。本发明的优点在于：本发明的方法具有取材方便、材料丰富，且能保持乌桕母本株系的优良性状的优点；并且还简化了整个繁育环节，缩短了育苗周期，节省了组培培养空间，为乌桕的工厂化繁殖提供了更可靠、操作性更强的技术依据。

技术领域

本发明属于植物快繁技术领域，具体涉及一种乌桕组培不定芽瓶外生根育苗的方法。

背景技术

乌桕(Sapium sebiferum Roxb.)为大戟科乌桕多年生落叶乔木，是一种集油用、观赏、水土保持及药用等多用途于一身的树种。乌桕为我国四大木本油料树种之一，种子含油量高达55％，为制取生物柴油的理想原料。乌桕树型优美，叶色秀丽，是一种集观果、观叶、观型与一身的景观树种，在我国已经有1400年的栽培史。此外，乌桕还具有适应性强，分布广，生长速度快等优势，是荒山造林的理想树种，具有较高的经济和生态价值。

目前，乌桕的繁殖方式主要包括播种、扦插和和组织培养等，由于乌柏为异花授粉植物，种子高度杂合，通过播种育苗存在较大的遗传变异性，不适于乌桕优良株系的繁殖。常规的扦插繁殖，虽可以实现对优良株系的繁殖，但由于繁殖速度慢，且繁殖受季节和母株限制等原因，很难满足优良品种大规模推广的需求。植物组织培养技术可在短期获得大量的、遗传背景一致的优良种苗，可满足规模化造林对乌桕优良株系种苗的需求。目前，有关利用植物组培技术对乌桕植株进行繁育的研究已有很多报道，但主要集中在以种子实生苗和野外植株的茎段为外植体，直接以野外优良株系的叶片为外植体进行离体再生的研究鲜有报道普。此外，现有的乌桕组培繁育技术普遍存在繁育过程繁琐、生产成本高、育苗周期长、占用室内空间大、移栽成活率低等问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供了一种周期短、成本低并且成活率高的乌桕组培不定芽瓶外生根育苗的方法。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：

本发明以乌桕优良株系的当年生幼嫩叶片为外植体，通过瓶内不定芽诱导结合瓶外生根技术，开发一种能够简化乌桕组培繁育步骤、缩短生产周期、降低生产成本且能提高乌桕移栽成活率的高效繁育技术。具体方案包括如下步骤：

1)取野外乌桕当年生幼嫩叶片为外植体，经表面消毒后，切块；

2)将步骤1)获得的叶片切块接种于诱导培养基中进行不定芽的诱导培养，产生不定芽；

3)将步骤2)产生的不定芽转接于新鲜的诱导培养基中进行不定芽的继代伸长培养；

4)待步骤3)中继代伸长培养后的不定芽长至2-4cm，并伴有2-6片叶子时，切下不定芽，清洗后进行瓶外不定根诱导预处理；

5)将步骤4)中经不定根诱导预处理后的不定芽定植于营养基质中，进行不定根的诱导和成苗培养，获得乌桕再生植株。

优选地，在步骤1)中，表面消毒的过程为将叶片剪去叶柄，于流水下冲洗20-30min，70％酒精擦拭后，置于无菌环境中，用无菌水冲洗2-3遍，70％酒精消毒20-30s，10％-20％过氧化氢溶液消毒2-4min，无菌水冲洗4-6遍。

优选地，在步骤1)中，切块为切成(0.3-1.0)×(0.5-1.0)cm²大小的叶片切块。

优选地，在步骤2)和3)中，诱导培养基为添加10-50mg/L VC、0.2-2.0mg/L2-ip、0.1-1.0mg/L ZT、0.02-0.5mg/L NAA、20-30g/L蔗糖和6.5-8.0g/L琼脂的WPM培养基。